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小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)酶聯免疫分析書

閱讀:119發布時間:2014-10-14

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    研域(上海)化學試劑有限公司

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小鼠ELISA試劑盒樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

小鼠ELISA試劑盒操作步驟:

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L)。

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

小鼠ELISA試劑盒注意事項:

1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.  濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.  各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,*使用排槍加樣。

4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.  底物請避光保存。

7.  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

E-(Mu)(05)-00060 小鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00061 小鼠白介素2(IL-2)ELISA檢測試劑盒  ,英文名: Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00062 小鼠白介素1α(IL-1α )ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00063 小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00064 小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00065 小鼠白介素16(IL-16)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 16,IL-16 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00066 小鼠白介素13(IL-13)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00067 小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00068 小鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00069 小鼠白介素11(IL-11)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: Interleukin 11,IL-11 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00070 小鼠白介素10(IL-10)ELISA檢測試劑盒  ,英文名: Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00071 小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA檢測試劑盒 ,英文名: insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit  ,規格: 96T/48T


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