智立中特（武漢）生物科技有限公司主要致力于質粒微生物資源的保護、共享和持續利用，圍繞我國生命科學研究、生物技術創新和產業發展等重大需求，探索、發現、收集國內外的微生物資源，妥善長期保存管理；在保證生物安全和保護知識產權的前提下，為工農業生產、衛生健康、環境保護、科研教育提供質粒載體物物種資源、基因資源、信息資源和專業技術服務。旗下質粒載體網是一款提供質粒載體展示及定制的專業型網站，由智立中特（武漢）生物科技有限公司聯合多家企業公司科研院校共同打造！主要展示了各種基因類型下的質粒載體！
我們的工作主要包括：廣泛分離、收集、保藏、交換和供應各類微生物質粒菌種；保存用于專，利程序的各種可培養生物材料；質粒載體類保藏技術研究；微生物分離、培養技術研究；微生物鑒定和復核技術研究；保藏菌種的資料情報收集和提供及編輯微生物菌種目錄。
目前保存各類載體資源超過20000余種，質粒微生物約5000株，另外我們還代理國外微生物菌種資源，如addgene，安捷倫，thermo，atcc等。
種屬：人源細胞系/食管、胃、腸、肝、膽
價格：詢價
到貨周期：10-15個工作日
詳情描述
細胞特性
1）來源：腸道
2）形態：上皮細胞樣
3）含量：>1x106個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完，全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰，酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存
