山梨醇含量檢測試劑盒微量法含量說明書

貨號：YX-W-B607

規格：100管/96樣

正式測定前務必取 2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

山梨醇廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，不僅是糖運輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風味密切相關。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經常需要檢測山梨醇含

量變化。

測定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍色絡合物，在 655nm波長有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 3.5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 3.5mL×1 瓶 ，4℃保存。

山梨醇含量檢測試劑盒山梨醇的提取：

按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至655nm，蒸餾水調零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

山梨醇含量檢測試劑盒混勻后室溫靜置 15min，8000g，25℃離心 10min，取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96

孔板中，測 655nm下吸光值 A，計算 ΔA=A 測定管-A 空白管。空白管只要做一管。

山梨醇含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y=0.352x-0.002；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、按照樣品質量計算

山梨醇含量（mg/g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002)÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)

=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg/mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)

=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y =0.176x - 0.002；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按照樣品質量計算

山梨醇含量（mg/g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)

=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg/mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)

=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

山梨醇含量檢測試劑盒注意：檢測限為 1μg/g 鮮重或0.01μg/mg prot