單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）檢測試劑盒活性微量法說明書
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
測定原理：
MDHAR催化NADH還原MDHA生成AsA和NAD +，NADH在340nm有特征吸收峰，但是NAD+沒有。通過測定340nm光吸收下降速率，來計算出MDHAR活性。
自備實驗用品及儀器：
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍和雙蒸水
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體×1 瓶，室溫保存。
試劑三：粉劑×1 瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解。試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前加3mL試劑二充分溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織， 加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500 萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔 7秒，總時間3min）； 8000g ，4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測。
3. 血清等液體：直接測定。
單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）檢測試劑盒MDHAR 測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到340nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預熱30min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μ L試劑三、20μ L試劑四、20μ L試劑五和120μ L 試劑二，最后加入20μ L上清液，迅速混勻后于340nm比色，記錄30s和150s的吸光值30s和150s 的吸光值A1和A2，△A=A1-A2。
MDHAR 活性計算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下(1). 按蛋白濃度計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH為1個酶活單位。MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε ÷d×V 反總×109]÷（Cpr×V 樣）÷T
= 804×△A ÷Cpr
樣本質量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH為1U。
MDHAR (nmol/min/g) = △A÷ε ÷d×V 反總×109]÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷W
(3). 按細胞數量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH為1個酶活單位。MDHAR (nmol/min/104cell) = △A÷ε ÷d×V 反總×109÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷ 細胞數量
(4). 按液體體積計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫升液體每分鐘氧化 1nmol NADH 為 1 個酶活單位。MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε ÷d×V 反總×10 9 ÷V 樣）÷T
= 804×△A
ε ：NADH 摩爾消光系數，6220 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應體系總體積， 0.2mL=2×10 -4 L；V 樣：加入反應體系中上清液體積，20μ L=0.02mL；V 樣總：提取液體積，
1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本公司蛋白質含量 BCA 試劑盒；W ：樣品質量；T：反應時間，2min。
單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）檢測試劑盒b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下：
(1). 按蛋白濃度計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADH 為 1 個酶活單位。MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε ÷d×V 反總×10 9 ]÷（Cpr×V 樣）÷T
= 1608×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化 1nmol NADH 為 1U。
MDHAR (nmol/min /g) = △A÷ε ÷d×V 反總×10 9 ]÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 1608×△A ÷W
（3） 按細胞數量計算
MDHAR 活性單位定義：25℃中每 10 4 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADH 為 1 個酶活單位。MDHAR (nmol/min/10 4 cell) = △A÷ε ÷d×V 反總×10 9 ÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）
÷T
= 1608×△A ÷ 細胞數量
（4） 按液體體積計算
單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）檢測試劑盒MDHAR 活性單位定義：25℃中每毫升液體每分