K-ETOH乙醇檢測試劑盒以下文字為中文翻譯，具體操作以英文版說明書為準，報價及貨期聯(lián)系我司客服。

（*60個手動化驗/試劑盒）或（每套件600個自動分析儀分析）或（每包600個微量板分析）

簡介：

乙醇在自然發(fā)生中無處不在，因此，乙醇的定量測定不僅對生產(chǎn)醉酒、啤酒和烈性酒都很重要，而且對于低酒精和非酒*料、果汁和一系列其他食品，包括巧克力、糖果、果醬、蜂蜜、醋和乳制品都具有重要意義。大量非食品中也含有大量乙醇，如化妝品和藥品。

原則：

乙醇的定量需要兩種酶反應(yīng)；在乙醇脫氫酶（ADH）催化的第一反應(yīng)中，乙醇被煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）（1）氧化為乙醛。⁺

（ADH）

（1） 乙醇+NAD⁺乙醛+NADH+H⁺

然而，由于反應(yīng)（1）的平衡有利于乙醇和NAD，因此需要進一步的反應(yīng)來“捕獲”產(chǎn)物。這是通過乙醛脫氫酶（Al-DH）和NAD（2）存在下乙醛氧化為乙酸實現(xiàn)的。⁺⁺

（Al DH）

（2） 乙醛+NAD+HO⁺₂乙酸+NADH+H⁺

該反應(yīng)過程中形成的NADH的量是乙醇量的兩倍的化學計量。它是通過340nm處吸光度的增加測量的NADH（圖1，第12頁）。

特異性、靈敏度、線性和精確度：

在分析過程中試劑的添加順序消除了醛和酮的任何可能干擾。甲醇由于所用酶的K值不利而無法轉(zhuǎn)化。對乙醇進行了優(yōu)化，同時也實現(xiàn)了正丙醇和正丁醇的定量轉(zhuǎn)化。較高的初級醇反應(yīng)速度顯著降低，在目前情況下，可能導致樣品依賴的蠕變反應(yīng)。_m

該方法的最小鑒別吸光度為0.005吸光度單位。這對應(yīng)于最大樣品體積為2.00 mL的樣品溶液的0.023 mg/L。檢測限為

0.093 mg/L，其來源于吸光度差為0.020，最大樣品體積為2.00 mL。

該方法在每次測定0.25至12μg乙醇范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。在使用一個樣品溶液進行重復測定時，可能發(fā)生0.005至0.010的吸光度差。樣品體積為2.00 mL時，這對應(yīng)于樣品溶液的乙醇濃度約為0.023至0.046 mg/L。如果樣品在樣品制備過程中被稀釋，則結(jié)果乘以稀釋系數(shù)F。如果在樣品制備過程中，稱重樣品，例如10 g/L，則可預(yù)期差值為0.02至0.05 g/100 g。

干擾：

蒸餾水中存在的醇和用于分析的緩沖液或空氣中，可導致空白增加或蠕變反應(yīng)。因此，在測定過程中，必須覆蓋試管。

如果乙醇的轉(zhuǎn)化在試驗規(guī)定的時間內(nèi)完成（約5分鐘），則一般可以得出結(jié)論，沒有發(fā)生干擾。但是，在反應(yīng)完成后，可向反應(yīng)杯中加入乙醇（約5μg in 0.1ml）進一步檢查。應(yīng)觀察到吸光度顯著增加。

分析樣品中的干擾物質(zhì)可通過包括內(nèi)部標準來識別。預(yù)計將對該標準進行定量恢復。通過進行回收試驗，即在初始提取步驟中向樣品中添加乙醇，確定樣品處理和提取過程中的損失。

安全性：

應(yīng)遵守適用于所有化學物質(zhì)的一般安全措施。

有關(guān)本產(chǎn)品安全使用和處理的更多信息，請參閱Megazyme網(wǎng)站上提供的相關(guān)SDS。

套件：

適用于手動格式（或600份自動分析儀格式的分析或600份微型板格式分析）的試劑盒可從Megazyme獲得。該試劑盒包含完整的分析方法和：

試劑溶液/懸浮液的制備：

1.            使用所提供的瓶子1的內(nèi)容。在4°C下穩(wěn)定2年以上。

2.            將瓶2的含量溶于12.4 mL蒸餾水中。

在4°C下穩(wěn)定1年以上或在-10°C以下穩(wěn)定2年以上（為避免重復的凍融循環(huán)，將其分成適當尺寸的小報價，并儲存在聚丙烯管中）。

3和4。使用所提供的瓶子3和4的內(nèi)容物。在打開之前，搖動瓶子，以去除可能已固定在橡膠塞上的任何酶。隨后，將瓶子存放在直立位置。使用前，旋動瓶子混合內(nèi)容物。

               在4°C（ADH）或低于-10°C（Al DH）下穩(wěn)定2年以上。

5.用蒸餾水稀釋0.5ml瓶中5至50 mL的含量。存放在密封良好的杜蘭瓶中。稀釋后，該溶液在4°C下穩(wěn)定2天。^®

K-ETOH乙醇檢測試劑盒注：僅在對所用分光光度計的準確性或懷疑樣品中物質(zhì)引起抑制的地方，才對乙醇標準溶液進行分析。乙醇濃度直接由NADH的消光系數(shù)確定（第4頁）。

設(shè)備（推薦）：

1.      容量瓶（50毫升和100毫升）。

2.      一次性塑料試管（1厘米光程，3.0毫升）。

3.      微型吸管器，例如Gilson Pipetman（20μL和100μL）。^®

4.      正位移管器，例如Eppendorf多個^®

-      用5.0 mL Combiti[分配0.2 mL緩沖液（瓶1）和NAD溶液]。^®+

-      加入25.0 mL Combiti（分配2.0 mL蒸餾水）。^®

5.      分析平衡。

6.      分光光度計設(shè)置為340nm。

7.      渦流混合器（例如IKA黃線試管振動臺TTS2）。^®

8.      Whatman 1號（9厘米）濾紙。

A、 手動分析程序：

逆風閱讀（光路中沒有反應(yīng)杯）或防水

*例如，使用微型平板振動器，在微型讀卡器上搖動功能或重復抽吸（例如，使用50-100μL體積的吸管器）。

**如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將樣品吸光度推回到懸浮液4的加入時間。

計算：

測定空白和樣品的吸光度差（A-A）。從樣品吸光度差中減去空白吸收差，從而獲得δa。δa的值應(yīng)至少為0.100個吸光度單位，以獲得足夠精確的結(jié)果。_{21乙醇乙醇}

乙醇濃度可計算如下：

c=V x MW xΔA[g/L]

                              εx d x v x 2

哪里：

V=最終體積[mL]

MW=乙醇分子量[g/mol]

ε=340nm時NADH的消光系數(shù)

=6300[l x mol x cm]d=光路[cm]v=樣品體積[mL]^-1-1

2=每摩爾乙醇產(chǎn)生的2摩爾NADH

乙醇的使用情況如下：

c=2.57 x 46.07 xΔA[g/L]_乙醇

6300 x 1.0 x 0.10 x 2

=0.09397 xΔA[g/L]_乙醇

乙醇的（v/v）術(shù)語如下：

c=2.57 x 46.07 x 0.1266 xΔA[%（v/v）]_乙醇

6300 x 1.0 x 0.10 x 2

=0.01190 xΔA[%（v/v）]_乙醇

哪里：

0.1266=將g/L轉(zhuǎn)化為%（v/v）的因子，取純乙醇的密度為0.79g/mL。

如果樣品在制備過程中被稀釋，則必須將結(jié)果乘以稀釋系數(shù)F。

分析樣品制備稱重的固體和半固態(tài)樣品時，根據(jù)稱重量計算含量（g/100g），如下所示：

乙醇含量

=西坦醇[g/L樣品溶液]x 100[g/100 g]

重量[g/L樣品溶液]_樣品

注：這些計算可以通過使用Megazyme MegaCalc進行簡化，可從產(chǎn)品出現(xiàn)在Megazyme網(wǎng)站上的位置下載^M

B、 自動分析儀分析程序：

筆記：

1.     乙醇自動分析儀測定程序可使用單點標準或全校準曲線執(zhí)行。

2.     對于用于乙醇測定的每批樣品，必須同時使用同一批試劑同時執(zhí)行單點標準或校準曲線。

試劑制備如下：

R1的準備：

R2的制備：

示例方法：

C、 微量板分析程序：

筆記：

1.     乙醇的微板分析程序可以使用單點標準或全校準曲線執(zhí)行。

2.     對于用于乙醇測定的每批樣品，必須同時使用同一批試劑同時執(zhí)行單點標準或校準曲線。

*例如，使用微型平板振動器，在微型讀卡器上搖動功能或重復抽吸（例如，使用50-100μL體積的吸管器）。

**如果樣品的“蠕變”率大于空白，則將樣品吸光度推回到懸浮液4的加入時間。

計算（微量板分析程序）：g/L=ΔA x g/L標準x F_樣品

                         Δ阿斯坦達

如果樣品在制備過程中被稀釋，則必須將結(jié)果乘以稀釋系數(shù)F。

樣品制備：

1樣品稀釋。

試管中存在的乙醇量（即在分析的0.1mL樣品中）應(yīng)在0.25至12μg之間。因此，必須充分稀釋樣品溶液，以產(chǎn)生0.01至0.12 g/L之間的濃度。

稀釋表

K-ETOH乙醇檢測試劑盒如果ΔA值過低（例如<0.100），則應(yīng)稱量更多樣品或稀釋較少。或者，將要被管道輸送到反應(yīng)杯中的樣品體積可增加到2.00 mL，確保反應(yīng)中的樣品和蒸餾水組分之和為2.10 mL，并使用方程式中的新樣品體積。_乙醇

2樣品處理。

由于乙醇易揮發(fā)，所有操作應(yīng)在可能的情況下，在密封的杜蘭玻璃瓶中進行。^®

同時，在管道、稀釋和過濾溶液中也要格外小心。取取等份前，用溶液沖洗配藥管的塑料尖3次。試管和塑料尖duan應(yīng)用無水蒸餾水沖洗3次，使用前干燥。

確保試劑瓶（特別是蒸餾水容器）在移除所需體積后立即密封，以盡量減少酒精從空氣中的吸收。在建立測定時，不要使用用于引用乙醇標準或其他濃縮乙醇溶液的移液管。

三。樣品澄清。

a、 解決方案：

卡雷斯一號解決方案。溶解3.60 g鐵氰hua鉀（II）{K[Fe（CN）].3HO}（Sigma cat）。編號P9387）100毫升蒸餾水。室溫下存放。₄₆₂

Carrez II解決方案。溶解7.20 g硫酸鋅（ZnSO.7HO）（Sigma cat。編號Z4750）100毫升蒸餾水。室溫下存放。₄₂

氫氧化鈉（NaOH，100 mM）。將4g NaOH溶解在1 L蒸餾水中。室溫下存放。

b、 程序：

將液體樣品移到100 mL容量瓶中，其中含有約60 mL蒸餾水，或?qū)⒆銐驍?shù)量的樣品稱為100 mL容量瓶，并添加60 mL蒸餾水。小心地加入5毫升卡雷斯一號溶液、5毫升卡雷斯II溶液和10毫升NaOH溶液（100 mM）。每次添加后混合。將容量瓶加注至標記處，混合并過濾。

4一般考慮事項。

（a） 液體樣品：測定中可直接使用透明、略帶顏色和近似中性的液體樣品。

（b） 酸性樣品：如果未稀釋（如葡萄酒或果汁）使用大于0.1 mL的酸性樣品，則應(yīng)使用2 M NaOH將溶液的pH值提高到約9.0，并在室溫下孵育30 min。

（c） 二氧化碳：含有大量二氧化碳的樣品，如啤酒，應(yīng)通過將pH值增加至約9.0（用2 M NaOH）和溫和攪拌或用玻璃棒攪拌來脫氣。

（d） 彩色樣品：對于有色樣品，可能需要額外的空白樣品，即無ADH的樣品。

（e） 強顏色樣品：如果使用未稀釋，應(yīng)通過添加0.2 g聚乙烯醇（PVPP）/10mL樣品處理強顏色樣品。用力搖動管5分鐘，然后通過Whatman 1號濾紙過濾。

（f） 固體樣品：在蒸餾水中均勻化或粉碎固體樣品，必要時過濾。

（g） 含脂肪的樣品：在脂肪熔點以上的溫度下，例如在60°C下的100 mL容量瓶中，用熱水提取此類樣品。調(diào)節(jié)至室溫，并用蒸餾水將容量瓶填充到標記處。在冰上或冰箱中存放15-30分鐘，然后過濾。丟棄前幾毫升濾液，并使用清清上清液（可能稍有乳白色）進行分析。或者，用Carrez試劑澄清。

（h） 含蛋白質(zhì)的樣品：（i）含有微生物的樣品：用高氯酸去蛋白樣品；或者用Carrez試劑澄清。使用注射器裝置通過0.2微米過濾器過濾樣品。

樣品制備示例：

（a） 酒中乙醇的測定。

白葡萄酒和紅酒的乙醇濃度一般不需任何樣品處理即可測定（稀釋表稀釋除外）。通常，對于乙醇含量為10-15%（v/v）的葡萄酒，稀釋度為1:1000，樣品體積為0.1mL是令人滿意的。

（b） 啤酒、蘋果酒和酒精果汁中乙醇的測定。

將溶液pH升高至約9，用2m NaOH，溫和攪拌去除二氧化碳后，按稀釋表稀釋樣品，并進行分析。通常，對于3-8%（v/v）乙醇的飲料，稀釋1:500和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。

（c） 非酒精和低酒精啤酒及其他飲料中乙醇的測定。

將溶液pH值提高至約9.0，用2m NaOH去除二氧化碳后，輕輕攪拌，按稀釋表稀釋樣品，并進行分析。通常，稀釋1:50和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。

（d） 酒精（威士忌、白蘭地等）中乙醇的測定。一般不需要任何樣品處理（根據(jù)稀釋表稀釋除外）即可測定烈性酒精濃度。但是，應(yīng)注意，一般需要兩個稀釋步驟。通常，對于30-60%（v/v）乙醇的酒精，稀釋1:10000和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。

（e） 果汁、濃縮液及相關(guān)飲料中乙醇的測定。

一般不需要任何樣品處理即可測定透明中性溶液的乙醇濃度（根據(jù)稀釋表稀釋除外）。未稀釋使用時，應(yīng)使用2m NaOH將酸性溶液的pH值提高到約9.0。濁液一般只需要在稀釋步驟之前進行過濾。著色溶液通常適用于稀釋至適當乙醇濃度后的分析。但是，如果有色溶液需要分析，則可能需要進行脫色處理，具體如下：使用聚乙烯醇（PVPP）或活性炭處理溶液

2 g/100 mL，并通過Whatman GF/A玻璃纖維濾紙過濾。通常，不需要稀釋，樣品體積應(yīng)達到0.5 mL。

（f） 固體食品（如利口酒巧克力）中乙醇的測定。

必要時，使用砂漿或均質(zhì)劑使固體食品均勻化（~10 g）。將2 g代表性材料加入50 mL無乙醇水中，并在密封的Duran瓶中攪拌30分鐘（必要時加熱60°C）。冷卻提取物（如有必要），并定量轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶。用無水乙醇稀釋至標記。過濾濁度溶液，必要時稀釋（根據(jù)稀釋表），并進行分析。通常，稀釋1:10和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。^®

（g） 醋中乙醇的測定。

一般來說，對醋的分析只需要在分析前過濾和稀釋。然而，在過濾前，應(yīng)使用2m NaOH將待分析樣品的pH值提高到大約9.0。通常，稀釋1:20和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。

（h） 果醬中乙醇的測定。

準確稱量約5 g代表性材料至100 mL Duran瓶中，并用50 mL無水乙醇萃取，攪拌30 min，60°C（密封瓶）。^®

冷卻提取物，如果是酸性，使用2 M NaOH將pH值調(diào)整至9.0。定量地將溶液轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，并用無水乙醇調(diào)節(jié)體積至標記。過濾濁度溶液，必要時根據(jù)稀釋表稀釋。通常，不需要稀釋，樣品體積應(yīng)達到0.5 mL。

（i） 蜂蜜中乙醇的測定。

準確稱量約10 g代表性物質(zhì)至100 mL容量瓶，其中含有40 mL無水乙醇，并立即將燒瓶塞住。蜂蜜在60℃下輕輕攪拌10分鐘，冷卻后，用無水乙醇調(diào)節(jié)至標記。過濾濁度溶液，必要時根據(jù)稀釋表稀釋。通常，不需要稀釋，樣品體積應(yīng)達到0.5 mL。

（j） 乳制品中乙醇的測定。

準確稱量約10 g代表性材料至100 mL Duran瓶中，并用50 mL無水乙醇萃取，攪拌30 min，60°C（密封瓶）。冷卻提取物，定量地將溶液轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，并用無水乙醇調(diào)節(jié)體積至標記。過濾濁度溶液，必要時根據(jù)稀釋表稀釋。通常，不需要稀釋，樣品體積應(yīng)達到0.5 mL。^®

（k） 未經(jīng)消毒的紅茶茶中乙醇的測定。

使用注射器裝置通過0.2微米過濾器過濾，去除微生物。通過在旋渦混合器上混合約30 s，從樣品中去除殘余氣體。通常，稀釋1:200和樣品體積為0.1ml是令人滿意的。

K-ETOH乙醇檢測試劑盒參考：

Beutler，H.O.（1988）。乙醇。“酶分析方法”（Bergmeyer，H.U.，ed），第3版，第六卷，第598-606頁，VCH出版社（英國）有限公司，英國劍橋。