綿羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）試劑盒（ELISA）使用說明書
? 本試劑盒用于體外定性檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中綿
羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）。
? 有效期：6個月
? 保存條件：2-8℃
實驗原理
試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。由于抗體產生量一般比較大，為避免HOOK
效應，試劑盒采用兩步法。往預先包被綿羊絲狀支原體抗體（M-MycoplasmalAb）捕獲抗原的
包被微孔中，依次加入標本、陰性和陽性對照，經過溫育并*洗滌，再加入HRP標記的檢測
抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在
酸 的 作 用 下 轉 化 成 最 終 的 黃 色 。 顏 色 的 深 淺 和 樣 品 中 的 綿 羊 絲 狀 支 原 體 抗 體
（M-MycoplasmalAb）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），判定陰陽性。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20
分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000
×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞
會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組
織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，
78
取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置
于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
