Flav7/FITC-石臍素/N-乙酰氨酸甲酯-CY3

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建立冷藏(4℃)保存48 h血小板膜糖蛋白GPⅠbα(CD42b)末端半乳糖基化及唾液酸化的方法。方法冷藏保存48 h后,將半乳糖基化底物UDP-gal及唾液酸化底物CMP-Neu Ac加入血小板保存袋中,37℃復溫1h,分別以FITC-s WGA、FITC-ECA標記血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端β-Glc NAc及β-Gal糖基,流式細胞術檢測糖基化。以FITC-CD42 b抗體標記血小板膜糖蛋白GPⅠbα,流式細胞術檢測冷藏保存以及糖基化處理對于GPⅠbα蛋白量的影響。以金屬蛋白酶(metalloproteinase,MP)劑GM6001MP對GPⅠbα的剪切,驗證冷藏保存以及糖基化處理對GPⅠbα的量的影響,并闡明其機制。結果 FITC-s WGA、FITC-ECA標記結果顯示,冷藏保存48h后37℃復溫1h處理(無論是否加入糖基化底物)可致膜表面GPⅠbα末端糖基暴露(以FITC熒光強度表示)降低,FITC-s WGA熒光強度由1918.2±526.2降1316.2±368.1,FITC-ECA熒光強度由8036.6±1466.3降5672.6±1522.7(P<0.05);同時可致膜表面GPⅠbα蛋白量降低,由1582.9±123.1降1380.7±136.7(P<0.05);加入GM6001后,GPⅠbα蛋白量恢復對照組水平1602.2±153.2。

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FITC標記N-乙酰氨酸甲酯
FITC標記N-乙酰-2,3-二脫氫-2-脫氧氨酸DANA

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