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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>今天課堂:比賽法測抗體的試驗(yàn)原理
當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體比賽與固相抗原結(jié)合。
標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因而陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可選用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后參與抗原,構(gòu)成固相抗原。
洗刷除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行比賽結(jié)合反應(yīng)。比賽法測抗體有多種形式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原比賽結(jié)合,抗HBc 。
ELISA一般選用此法。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一起參與到固相抗體中進(jìn)行比賽結(jié)合,洗刷后再參與酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)。抗HBe的檢測一般選用此法。
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點(diǎn),因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定,可以選用比賽法形式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原比賽與固相抗體結(jié)合。
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