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技術(shù)文章

胎盤生長因子試劑盒樣本處理及要求

閱讀:484發(fā)布時(shí)間:2020-10-21

胎盤生長因子試劑盒原理:

免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用得到的,而抗原胎盤生長因子試劑盒或抗體的如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。

胎盤生長因子試劑盒細(xì)胞培養(yǎng)上清:

1 用胎盤生長因子試劑盒收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液。

2 用離心機(jī)4℃,2000rpm離心15min左右,將離心好的勻漿小心收集上清,棄下面沉淀。

3 取上清并分裝保存?zhèn)溆?,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

胎盤生長因子試劑盒細(xì)胞裂解液:

1 取胎盤生長因子試劑盒板或細(xì)胞懸液,用PBS(PH7.2-7.4)洗滌細(xì)胞培養(yǎng)板1-2次。

2 通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑(裂解液),使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。

3 用離心機(jī)4℃,2000rpm離心20min左右,將離心好的勻漿小心收集上清,棄下面沉淀。

4 取上清并分裝保存?zhèn)溆?,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

胎盤生長因子試劑盒樣本處理及要求:

1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。
仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使胎盤生長因子試劑盒破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 


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