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酶聯免疫試劑盒檢測程序的注意事項

閱讀:481發布時間:2020-10-14

酶聯免疫試劑盒樣品處理:

1、  采集病人空腹血,將血液收集到試管中。盡可能早地使血清與血凝塊分離(3000rpm離心6分鐘以上),以免溶血。嚴重溶血和脂血樣品會影響檢測結果的準確性。

2、  樣品2-8℃密封儲存,超過48小時應凍存,避免反復凍融。

3、  樣品使用前需置室溫(18-25℃)融化并充分搖勻,平衡30分鐘后再進行測試。

酶聯免疫試劑盒注意事項:

1、  從冷藏環境中取出的試劑盒內全部瓶裝酶聯免疫試劑盒及所需預包被板條應置室溫(18-25℃)平衡30分鐘后方可使用;余者應及時封好口,放回2-8℃中避光保存,以備后用。

2、  使用前試劑應搖動混勻。不同批號的試劑不可混用。

3、  顯色劑A/B、終止液1滴為50ul,滴加時應先棄去2滴以確保沒有氣泡。

4、  使用一次性吸頭,每個標準點及血樣均更換吸頭。在一個板孔中加入多種試劑時,第一種試劑加在板孔左下壁,第二種試劑加在板孔右上壁高于液面,這樣可以有效的避免交叉污染。

5、  用移液器加25ul標準或樣品時應打到2檔,加標記物抗體和酶時可以選擇1檔或2檔。為保證充分搖勻。應使用酶標板振蕩器。 

酶聯免疫試劑盒儲存條件和有效期:

酶聯免疫試劑盒在使用前后可以一直儲存于2-8℃直到效期末。

不能將整個試劑盒置-20℃凍存。

酶聯免疫試劑盒檢測程序:

1、所有的樣品用標本稀釋液1:41稀釋。(10ul樣品+400ul樣品稀釋液,可用一次性試管配制。)

2、將各種試劑轉移至室溫(18-25℃)平衡半小時,取濃縮洗滌液,根據當批檢測數量,用蒸餾水1:20稀釋,混勻后備用。

3、將預包被板從密封袋中取出,每個標準點依次各設兩孔,每孔加入相應標準品25ul;其余每個檢測孔直接加質控或稀釋后待測血清25ul。然后各孔酶聯免疫試劑盒加入*標記抗體25ul,在振蕩器上充分混勻,貼上不干膠封片。置37℃溫育1小時。

4、手工洗版:棄去孔內液體,洗滌液注滿各孔,靜置10秒甩干,重復3次后在吸水紙上拍干。

洗板機洗板:選擇洗滌3次程序洗板后拍干。

5、  每孔加入酶結合物50ul,充分搖勻,置37℃溫育2小時。

6、洗板同程序4。

7、每孔加顯色劑A液50ul,顯色劑B液50ul,振蕩混勻后,置37℃避光顯色15分鐘,每孔加終止液50ul。

8、用酶標儀讀數,取波長450nm(建議使用雙波長的酶標儀比色,參考波長630nm)。 


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