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上海博湖生物科技有限公司
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閱讀:291發布時間:2019-9-27
秋天,大部分樹葉都漸漸地變黃了,有的已經枯落下來了,唯有楓葉紅了起來,火紅火紅的,為了秋天增添了一道亮麗的風景線,真是霜葉紅于二月花啊!接下來介紹 人膠質瘤組織源細胞培養試劑盒說明
細胞培養操作規程;
一.規格培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項;
1. 一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養液吸出,留下10ml培養液繼續培養;超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
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