為何ELISA實驗血清樣本都需要稀釋呢?

　　每一盒ELISA試劑盒里面都有一份對應的說明書，而每一份說明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋比例，為什么樣本都需要稀釋呢?今天的文章中，古朵生物技術小編將為您分析：為何ELISA實驗血清樣本都需要稀釋?

　　在ELISA試劑盒實驗血清為什么要稀釋?有兩個原因：

　　1)競爭抑制比較明顯，應稀釋競爭物;

　　2)以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。

　　血清稀釋用普通的PBS即可，可加1%的BSA，能有效降低ELISA本底，當然如果你嫌麻煩我覺得用生理鹽水替代PBS關系也不大。不管你是用直接競爭還是間接競爭，血清的稀釋倍數肯定要事先確定，但也不用一點點，你做一個預試驗即可，選擇OD在1.0左右的稀釋倍數，即你的競爭ELISA中陰性孔OD在1.0，這樣作出來的曲線比較敏感。

　　ELISA試劑盒實驗稀釋血清的步驟：

　　先把蛋白稀釋一定的倍數，比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個參數)，將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌，再加酶結合物進行反應，經孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應后分別測定O.D值，選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。

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