ELISA實驗之洗滌小技巧及提純的方法

　　在ELISA實驗中，主要是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，卻也決定著實驗的成敗。通過洗滌來清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。今天古朵生物技術小編來介紹一下ELISA實驗的洗滌小技巧吧!

　　洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：

　　(1)浸泡式

　　a.吸干或甩干孔內反應液;

　　b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去);

　　c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短;

　　d.吸干孔內液體。吸干應，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;

　　e.重復操作c 和d，洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合，從而削弱蛋白質與固相載體的結合，并借助于親水基團和水分子的結合作用，使蛋白質回復到水溶液狀態，從而脫離固相載體。

　　(2)流水沖洗式

　　流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為，且也簡便、快速。

　　已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。

　　Elisa試劑盒提純的方法：

　　在ELISA實驗中，ELISA試劑盒的好壞會直接影響實驗的最終結果，今天就向大家介紹一下ELISA試劑盒提純的方法。

　　1、蒸餾：對于易揮發的試劑，如常用的無機酸，有機溶劑等是比較常用的提純方法，可以根據沸點的高低選用常壓或減壓蒸餾法。

　　2、升華：對于某些易升華的試劑，如碘、萘等，此法比較簡便。

　　3、重結晶：適用于大多數固體試劑的提純，其關鍵是選擇好合適的溶劑。

　　4、溶劑萃取：無論是將母體還是將雜質萃取到有機溶劑相中，均可達到提純的目的。

　　5、離子交換色譜分離。

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