糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用)

　　產品及特點本產品為在 PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上檢測糖蛋白的試劑盒。該方法使用三種試劑，所需時間僅需不到兩小時，而其他的染色方法需 要四到五小時。染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無色。它有如下特點：

　　1. 一站式，包括一種陽性對照蛋白及一種陰性對照蛋白，用戶不要單獨配制 所需成分，簡單快捷。

　　2. 通過共價修飾方式檢測糖基，不檢測蛋白部分。

　　3. 靈敏度一般可以達到微克級別，但實際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關。

　　4. 可以用于 SDS-PAGE 和 2D 電泳的凝膠檢測，也可以用于瓊脂糖凝膠電 泳的檢測(但背景較高)，還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。

　　5. 本產品足夠染色 10 張 mini-PAGE 膠或 20 張 8×8cm 的蛋白印跡纖維 素膜。

　　糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用)

　　規格及成分 成份 編號 大紙盒包裝

　　氧化試劑 131075a 2.5 g(棕色管)

　　糖蛋白染色試劑 131075b 250 mL(棕色瓶)

　　還原試劑 131075c 1.25 g

　　陽性對照(辣根過氧化物酶) 131075d 1 mg(棕色管)

　　陰性對照 131075e 1 mg(棕色管)

　　250mL 塑料瓶(空) - 2 個

　　使用手冊 131075sc 1 份

　　糖蛋白染色試劑盒(PAGE膠專用)運輸及保存 常溫運輸和保存，但陽性對照和陰性對照干粉需要 4℃或更低溫度長期保存， 有效期一年，但糖蛋白染色試劑的有效期只有半年(從出廠時間開始計算)。

　　自備試劑 甲醇、冰醋酸、超純水、1×SDS-PAGE 上樣緩沖液等

　　使用方法 實驗前

　　使用方法 實驗前準備

　　1. 配制 3%醋酸溶液：將 30 mL 自備的冰醋酸與 970 mL 超純水混勻，室 溫保存備用。

　　2. 配制 50%甲醇溶液：將 250 mL 甲醇與 250 mL 超純水混勻，室溫保存 備用。

　　3. 配制氧化試劑溶液：將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉移到本試劑盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液(第 1 步配制)， 充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，室溫保存備用。

　　4. 配制還原試劑溶液：將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉移到本試劑盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超純水，充分混勻溶解后得 到還原試劑溶液，室溫保存備用。

　　5. 配制陽性對照(辣根過氧化物酶)溶液：向裝有 1 mg 辣根過氧化物酶固 體的棕色管中加入 1 mL 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液(自備)，所得辣 根過氧化物酶溶液的濃度即為 1mg/mL，然后分裝成 100uL/管共 10 管，留下一管當天使用，其余的放-20℃長期保存。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每條泳道加 10 μL 的陽性對照溶液即可。

　　6. 配制陰性對照溶液：向裝有 1 mg 抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液(自備)，所得大豆 抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/mL，然后分裝成 100uL/管共 10 管，留下一管當天使用，其余的放-20℃長期保存。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每個泳道加 10 μL 的陰性對照溶液即可。

　　7. 樣品稀釋：用 SDS-PAGE 上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為 1mg/mL， SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為 1×。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來 說，每個泳道加 10μL 的樣品。 凝膠染色的操作步驟(注意:請在通風櫥中進行以下操作)

　　8. 取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，加入到裝有 100mL 50%甲醇溶液的器 皿中，浸泡 30 分鐘后，倒出甲醇溶液。

　　9. 用 100mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

　　10. 將膠塊轉移到裝有 25mL 氧化試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。

　　11. 用 100mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

　　12. 將膠塊轉移到裝有 25mL 糖蛋白染色試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。 (注：若染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。)

　　13. 將膠塊轉移到裝有 25mL 還原試劑的器皿中，輕輕振蕩 5 分鐘。

　　14. 用 3%醋酸溶液洗滌膠塊，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現為品 紅條帶。膠塊保存在 3%醋酸溶液中。

　　硝化纖維素膜染色的操作步驟(注意:請在通風櫥中進行以下操作)

　　1. 用 20mL 3%醋酸溶液洗滌膜兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

　　2. 將膜轉移到 10mL 的氧化試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。

　　3. 用 10mL 3%醋酸溶液洗滌膜 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

　　4. 將膜轉移到 10mL 的糖蛋白染色試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。(注：若染 色試劑中有晶體析出，只需離心取上清液去除晶體即可，不要加熱來溶解 晶體。)

　　5. 將膜轉移到 10 mL 還原試劑中，輕輕振蕩 5 分鐘。

　　6. 用 3%醋酸溶液洗滌膜，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現為品紅 條帶。膜可保存在 3%醋酸溶液中。

　　7. 檢測后如果沒有條帶，可以用轉膜后的 PAGE 膠進行檢測，因為糖蛋白 (尤其是高度糖基化的蛋白)轉膜效果比較差。

　　糖蛋白染色試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒