Β-半乳糖苷酶染色試劑盒的應(yīng)用

　　Β-半乳糖苷酶染色試劑盒是一種基于衰老時(shí)SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上調(diào)而對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè)的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織的衰老情況。

　　絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。衰老細(xì)胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，并且衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制的情況。衰老細(xì)胞通常體積變會(huì)大，表達(dá)pH 6.0時(shí)有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細(xì)胞衰老也被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

　　Β-半乳糖苷酶

　　本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測(cè)。貝博β-半乳糖苷酶染色試劑盒以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本試劑盒僅染色培養(yǎng)細(xì)胞中的衰老細(xì)胞，對(duì)衰老前的細(xì)胞(presenescent cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent cells)、永生細(xì)胞(immortal cells)或腫瘤細(xì)胞等不會(huì)染色。

　　Β-半乳糖苷酶染色試劑盒操作步驟

　　染色工作液的配制方法如下：

　　試劑C：β-半乳糖苷酶染色液A 12.5ul

　　試劑D：β-半乳糖苷酶染色液B 12.5ul

　　試劑E：β-半乳糖苷酶染色液C 925ul

　　試劑B：X-Gal溶液50ul

　　注意：

　　1.使用聚丙烯容器，不能使用聚苯乙烯容器配置染色工作液。

　　2.對(duì)于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡(jiǎn)單的判定方法：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌;而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓就會(huì)嚴(yán)重變形。

　　(一)Β-半乳糖苷酶染色試劑盒貼壁細(xì)胞染色：

　　1、對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1ml試劑A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15min。

　　【注】：對(duì)于其他類(lèi)型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

　　2、吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞2-3次，每次3min。

　　3、吸除PBS或HBSS，每孔加入1ml染色工作液。以充分蓋住樣品為宜。

　　4、37℃孵育2h至過(guò)夜，直至樣品顯藍(lán)色，一般2-3h會(huì)有藍(lán)色出現(xiàn)，12-16h后達(dá)到顯色。可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。以充分蓋住樣品為宜。

　　【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

　　5、普通光學(xué)顯微鏡觀察。

　　如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2mlPBS，4℃可保存數(shù)天;

　　或者加上封片液封片后，4℃可保存較長(zhǎng)時(shí)間。

　　(二)Β-半乳糖苷酶染色試劑盒懸浮細(xì)胞染色：

　　1、離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1ml試劑A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15min。

　　【注】：固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng)，以免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。

　　2、低速離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞2-3次，每次3min。

　　3.低速離心、吸除PBS或HBSS，每管加入0.5~1ml染色工作液。

　　4.37℃孵育2h至過(guò)夜。直至樣品顯藍(lán)色，一般2-3h會(huì)有藍(lán)色出現(xiàn)，12-16h后達(dá)到

　　顯色。可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。以充分蓋住樣品為宜。

　　【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

　　5.取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡觀察。

　　如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心去除染色工作液，加入1mlPBS，4℃可保存數(shù)天;

　　如離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可保存較長(zhǎng)時(shí)間。

　　Β-半乳糖苷酶染色試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿(mǎn)足客戶(hù)的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿(mǎn)意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒