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常用微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制過(guò)程中需要注意的幾個(gè)點(diǎn)
閱讀：54 發(fā)布時(shí)間：2025-1-10注意營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度比和C/N比，如:糖分含量要適合微生物生長(zhǎng)才能良好,糖分過(guò)多則抑制微生物生長(zhǎng)。一般微生物適宜C/N是25:1[ 元素C/N的比值,也指培養(yǎng)基中還原糖的含量與粗蛋白質(zhì)含量的比值 ]。
微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制關(guān)鍵點(diǎn)
第一，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適
培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低時(shí)不能滿(mǎn)足微生物正常生長(zhǎng)所需，濃度過(guò)高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用，例如高濃度糖類(lèi)物質(zhì)，無(wú)機(jī)鹽，重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)，反而起到抑菌或殺菌作用。
另外，培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和[ 或 ]代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比[ C/N ]的影響較大。嚴(yán)格地講，碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值，有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如，在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)的過(guò)程中，培養(yǎng)基碳氮比為4/l時(shí)，菌體大量繁殖，積累少；當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/l時(shí)，菌體繁殖受到抑制，產(chǎn)量則大量增加。再如，在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中，可以通過(guò)控制培養(yǎng)基中速效氮[ 或碳 ]源與遲效氮[ 或碳 ]源之間的比例來(lái)控制菌體生長(zhǎng)與抗生素的合成協(xié)調(diào)。
第二，控制pH條件
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿(mǎn)足不同類(lèi)型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類(lèi)微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的最適pH條件各不相同，一般來(lái)講，細(xì)菌與放線(xiàn)菌適于在pH7～7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5～6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是，在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過(guò)程中，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制，往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或[ 和 ]代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此，為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽[ 如KH2PO4和K2HPO4 ]組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時(shí)，H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物，培養(yǎng)基pH不會(huì)過(guò)度降低；如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物，培養(yǎng)基pH也不會(huì)過(guò)度升高。
但KH2PO4和K2HPO44緩沖系統(tǒng)只能在一定的pH范圍[ pH6.4～7.2 ]內(nèi)起調(diào)節(jié)作用。有些微生物，如乳酸菌能大量產(chǎn)酸，上述緩沖系統(tǒng)就難以起到緩沖作用，此時(shí)可在培養(yǎng)基中添加難溶的碳酸鹽[ 如CaCO3 ]來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)，CaCO3難溶于水，不會(huì)使培養(yǎng)基pH過(guò)度升高，但它可以不斷中和微生物產(chǎn)生的酸，同時(shí)釋放出CO2，將培養(yǎng)基pH控制在一定范圍內(nèi)。
在培養(yǎng)基中還存在一些天然的緩沖系統(tǒng)，如氨基酸，肽，蛋白質(zhì)都屬于兩性電解質(zhì)，也可起到緩沖劑的作用。
第三，原料來(lái)源的選擇
在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。例如，在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，常常利用糖蜜[ 制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液 ]，乳清[ 乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液 ]，豆制品工業(yè)廢液及黑廢液[ 造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿 ]等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如，工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水，廢渣作原料，而在我國(guó)農(nóng)村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外，大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品，如鼓皮，米糠，玉米漿，酵母浸膏，酒糟，豆餅，花生餅，蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。
第四，滅菌處理
要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用 1.05kg/cm2，121.3攝氏度條件下維持15～30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類(lèi)物質(zhì)形成氨基糖，焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/ cm2，112.6攝氏度15～30min進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類(lèi)要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽，碳酸鹽與某些陽(yáng)離子[ 特別是鈣，鎂，鐵離子 ]結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸[ EDTA ]。還可以將含鈣，鎂，鐵等離子的成分與磷酸鹽，碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變[ 一般使pH降低0.2 ]，可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。