細(xì)胞增殖的測(cè)量和監(jiān)測(cè)是任何實(shí)驗(yàn)室中bi不可少的技術(shù)專注于基于細(xì)胞的研究。該技能還允許優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件作為細(xì)胞因子，生長因子或激素活性的測(cè)定。更重要的是，細(xì)胞抑制丨毒理學(xué)測(cè)試中抗癌化合物的性質(zhì)，治療化學(xué)品在藥物中的功效篩選和細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性都可以通過定量和監(jiān)測(cè)來評(píng)估細(xì)胞增殖。

細(xì)胞增殖特征包括細(xì)胞代謝活性和細(xì)胞膜完整性。一個(gè)測(cè)量代謝活性的方法是用四唑鹽如WST-1孵育細(xì)胞，通過代謝活性細(xì)胞裂解成有色甲product產(chǎn)物。同樣，綠色熒光染料Calcein-AM可以測(cè)量增殖活細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)酯酶活性是細(xì)胞活力的另一個(gè)指標(biāo)。

艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒測(cè)定原理：

Cell Biolabs的CytoSelect™ MTT細(xì)胞增殖測(cè)定提供了比色形式測(cè)量和監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖。該試劑盒含有足夠的試劑用于評(píng)估在96孔板中進(jìn)行960次測(cè)定或在24孔板中進(jìn)行192次測(cè)定。細(xì)胞可以被鍍，然后用影響增殖的化合物或藥劑。然后用增殖試劑檢測(cè)細(xì)胞，在活細(xì)胞中由黃色四唑MTT轉(zhuǎn)化為紫色福爾馬贊形式細(xì)胞還原酶（圖1）。細(xì)胞增殖的增加伴隨著信號(hào)的增加，雖然細(xì)胞增殖（和信號(hào)）的減少可以表明化合物的毒性作用或次優(yōu)的培養(yǎng)條件。該測(cè)定原理是基本的，可應(yīng)用于大多數(shù)真核生物細(xì)胞系，包括貼壁和非貼壁細(xì)胞以及某些組織。這種細(xì)胞增殖試劑可用于檢測(cè)細(xì)菌，酵母，真菌，原生動(dòng)物以及培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物中的增殖

和魚細(xì)胞。

艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒相關(guān)研究：

1.CBA-080:CytoSelect™ 24孔失巢凋亡測(cè)定

2.CBA-081:CytoSelect™ 96孔失巢凋亡測(cè)定

3.CBA-230：細(xì)胞衰老測(cè)定試劑盒（SA-b-gal染色）

4.CBA-231:96孔細(xì)胞衰老測(cè)定（SAβ-Gal活性）

5.CBA-232：定量細(xì)胞衰老測(cè)定（SAβ-Gal）

6.CBA-240：細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性測(cè)定

7.CBA-251細(xì)胞選擇™ BrdU細(xì)胞增殖ELISA試劑盒

8.CBA-253細(xì)胞選擇™ WST-1細(xì)胞增殖測(cè)定試劑

套件組件

1.MTT細(xì)胞增殖測(cè)定試劑（部件號(hào)125201）：一瓶10mL MTT試劑。

2.洗滌劑溶液（部件號(hào)125202）：一瓶100毫升洗滌劑溶液

艾美捷MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒測(cè)定方案：

1.制備含有0.1-1.0 x 106的細(xì)胞懸液培養(yǎng)基中的細(xì)胞/ml。

2.將每孔100μL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)物中有或沒有待測(cè)化合物的板。細(xì)胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時(shí)加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。

3.加入10μlCytoSelect™ MTT細(xì)胞增殖測(cè)定試劑，如果使用96-孔板，或24孔板的每個(gè)孔50µL。

4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時(shí)，直至可見紫色沉淀（細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物）

5.在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤子。

6.在室溫下孵育2小時(shí)至避光過夜。

注意：在井中與洗滌劑溶液長時(shí)間孵育可能導(dǎo)致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀，將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。

7.使用540-570nm作為主波長讀取吸光度。

相關(guān)文獻(xiàn)：

1. Jacobsen MD, Weil M, Raff MC. (1996) J Cell Biol 133, 1041.

2. Papadopoulos NG, Dedoussis GV, Spanakos G, Gritzapis AD, Baxevanis CN, Papamichail M.

(1994) J Immunol Methods 177, 101.

3. Yamaori S, Ishii H, Chiba K, Yamamoto I, Watanabe K (2013) Toxicology 314, 251

4. Wang Y, Qu L, Gong L, Sun L, Gong R, Si J (2013) Cancer Biother Radiopharm. 28, 623