CIK細胞實驗方法,即細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-Induced Killer,CIK)是一種新型的免疫活性細胞,CIK增殖能力強,細胞毒作用強,具有一定的免疫特性。
由于該細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子,故又稱為NK細胞(自然殺傷細胞)樣T淋巴細胞,兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性,和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優點。該細胞對腫瘤細胞的識別能力很強,如同“細胞”,能精確“點射”腫瘤細胞,但不會傷及“無辜”的正常細胞。尤其對手術后或放*后患者*,能消除殘留微小的轉移病灶,防止癌細胞擴散和復發,提高機體免疫力,因此,CIK細胞被認為是新一代的腫瘤過繼細胞*的*方案。
CIK細胞可以通過多機制抗腫瘤、抗病毒:
1.CIK細胞能以不同的機制識別腫瘤細胞,通過直接的細胞質顆粒穿透封閉的腫瘤細胞膜進行胞吐,釋放穿孔素、顆粒酶,實現對腫瘤細胞的裂解;
2.CIK細胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多種炎性細胞因子,對腫瘤也有直接抑制作用;
3.CIK細胞可以通過配體-受體(Fas:FasL)介導的方式誘導腫瘤細胞凋亡,因此CIK尤其適用于FasL陽性腫瘤的治療;
4.CIK細胞分泌的細胞因子能顯著刺激初始型T細胞增殖,有效激活機體的免疫系統,使之趨于正常,提高病人自身抗腫瘤的能力。
目前,腫瘤的發生機制尚未形成普遍接受的理論。研究者普遍認可腫瘤的發生、發展與人體的免疫功能密切相關。即在正常情況下,腫瘤與機體的防御機能之間處于一種動態的平衡,而一旦這種平衡被破壞,就可能發生腫瘤。身體各組織細胞受到外界化學、物理、生物等因素刺激或自身細胞衰老變異等因素的影響,使得體內某些細胞發生突變,成為癌前細胞;而機體免疫功能低下或者由于免疫異常,無法及時識別、殺傷、清除這些異常細胞,突變細胞在組織內復制生長,達到一定數量后破壞器官功能,腫瘤即發生。腫瘤患者,尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能、特別是細胞免疫功能低下,因而疾病呈進展、活動、預后差。因此,提高機體免疫力,建立有效的免疫應答是治療腫瘤zui有希望的途徑。CIK細胞治療即將大量殺傷性高、功能強、數量多的免疫活性細胞回輸患者體內,直接發揮殺死腫瘤細胞的作用,并通過調節、激活患者的免疫體系,調動、提高患者自身的抗腫瘤能力。
CIK細胞具有以下突出的特點:
1.增殖速度快,殺瘤活性高。CIK細胞可以在體外大量擴增,培養14天可以增殖200倍以上,其效應細胞CD3+CD56+的增殖可達1000倍以上,抗腫瘤活性得以大大增強。
2.殺瘤譜廣。CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷是非MHC限制的,對多種腫瘤細胞均有殺滅作用。
3.能抵抗腫瘤細胞引發的效應細胞Fas-FasL凋亡。CIK細胞雖然在Fas被占據后會引起少量細胞凋亡,但對其殺瘤細胞毒性沒有明顯影響;反之,CIK細胞可以誘導FasL陽性腫瘤細胞的凋亡。
4.對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感。CIK細胞對放、*敏感的親本細胞和不敏感的轉化細胞均具有強大的殺傷活性。
5.CIK細胞殺瘤活性不受CsA(*A)和FK506(普樂可復)等免疫抑制劑的影響。
6.對正常骨髓造血前體細胞毒性小,僅對紅系生成產生輕微的抑制,這可能與CIK細胞自身分泌高水平的IFN-γ有關。
7.CIK細胞具有識別腫瘤的機制,特異性強,對正常的細胞無毒性作用。
8.安全性好。CIK細胞是活化的患者自體細胞,應用安全,不會產生排斥等反應,患者副反應小。
優勢:
1、細胞株種類齊全,包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株,如:人滑膜細胞,人胃癌細胞,人細胞,人腎近曲小管上皮細胞,肝癌細胞,心肌細胞,子宮內膜細胞等
2、*,專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株,免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片,三天回傳細胞生長狀態圖片,五天內有問題公司負責重發,超過五天時限至一個月內重發細胞收半價,超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠,完善、穩定的實驗體系,優秀的科研隊伍,*的實驗設備、準確可靠的實驗結果,是您可靠的合作伙伴
6、此外,我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2、培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
間隙連結蛋白31.9抗體 GJC1
甘油激酶2抗體 GK2
β-半乳糖苷酶1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體 GLB1
*脫羧酶P蛋白抗體 GLDC
核孔蛋白GLE1抗體 GLE1
腎小球上皮蛋白1抗體 GLEPP1
轉錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體 GLI4
麥角蛋白抗體 Gliadin
膠質瘤發病相關蛋白1抗體 GLIPR1L1
糖基轉移酶25結構域1/前膠原半乳糖基轉移酶1抗體 GLT25D1
*酰胺水解酶抗體 GLS2
糖基轉移酶25結構域2/前膠原半乳糖基轉移酶2抗體 GLT25D2
糖基轉移酶28家族1抗體 GLT28D1
糖基轉移酶6結構1抗體 GLT6D1
膠質瘤抑癌候選基因2抗體 GLTSCR2
磷酸化糖皮質激素受體抗體 Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226)
葡萄糖轉運蛋白6抗體 GLUT6
糖皮質激素受體β抗體 Glucocorticoid Receptor beta
胰島葡萄糖6磷酸酶2抗體 Glucose 6 phosphatase 2
葡萄糖氧化酶抗體 Glucose Oxidase
葡萄糖苷酶2β/Glucosidase IIβ抗體 Glucosidase 2 subunit beta
*脫氫酶2抗體 GLUD2
磷酸化*受體1抗體 phospho-GluR1 (Thr840)
γ-谷氨酰水解酶抗體 GGH
谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶抗體 Glutamyl Prolyl tRNA synthetase/ProRS
谷氧還蛋白2抗體 Glutaredoxin 2
谷氧還蛋白5抗體 Glutaredoxin 5
*過氧化酶2抗體 GPX2
*過氧化酶7抗體 GPX7
*S轉移酶α1抗體 GSTA1
*S轉移酶κ抗體 GSTK1
化受體結合**激酶2抗體IgG 大麥葉片原生質細胞分離試劑盒 0.2ml
Ai-Shrimp tropomyosin /FITC 熒光素標記南美白對蝦過敏原蛋白(蝦原肌球蛋白)抗體IgG 煙草葉片原生質細胞分離試劑盒 0.2ml
Ai-SIP1 /FITC 熒光素標記運動神經元存活蛋白結合蛋白1抗體IgG 植物質粒菌化試劑盒 0.2ml
Ai-SIRT1/FITC 熒光素標記沉默調節蛋白1抗體IgG 純化葉綠體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser47) /FITC 熒光素標記磷酸化沉默調節蛋白1抗體IgG 植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC 熒光素標記磷酸化沉默調節蛋白1抗體IgG 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-Skp2/FITC 熒光素標記細胞S相激酶相關蛋白抗體IgG 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA高純分離試劑盒 0.2ml
Ai-SLC4A4/FITC 熒光素標記*協同轉運蛋白4-A4抗體IgG 植物細胞葉綠體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-Slc4a7/Nbcn1 /FITC 熒光素標記*協同轉運蛋白4-A7抗體IgG 大量植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-SLC6A19 /FITC 熒光素標記鉀依賴鈉鈣交換蛋白6IgG 通用型植物線粒體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-SLC16A3/MCT-4/FITC 熒光素標記MCT4抗體IgG 高多糖/酚植物線粒體DNA萃取試劑盒 0.2ml
Ai-Slc22A17/FITC 熒光素標記可溶性載質轉運蛋白22A17抗體IgG 植物基因組DNA純化試劑盒(低多糖/酚) 0.2ml
Ai-SLC24A5/FITC 熒光素標記可溶性載質轉運蛋白SLC24A5抗體IgG 植物基因組DNA純化試劑盒(高多糖/酚) 0.2ml
Ai-SLC33A1/FITC 熒光素標記乙酰*轉運蛋白1抗體IgG 果菜類食物DNA分離試劑盒 0.2ml
Ai-SLC34A2/NaPi-2b/FITC 熒光素標記磷酸鈉協同轉運蛋白抗體IgG 稻麥類食物DNA分離試劑盒 0.2ml
Ai-Slc26a5/Prestin/FITC 熒光素標記外毛細胞運動