【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng):L Wnt-3A（小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞）操作步驟
細(xì)胞形態(tài)
成纖維細(xì)胞樣
背景描述
L Wnt-3A細(xì)胞是由L-M(TK-)細(xì)胞用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選出的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號(hào)功效分泌性糖蛋白，Wnt基因控制胚胎發(fā)過(guò)程中的許多模式形成和生長(zhǎng)事件。L Wnt-3A細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，L Wnt-3A細(xì)胞是目前Wnt-3A條件培養(yǎng)基的來(lái)源。由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對(duì)于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來(lái)源細(xì)胞株作對(duì)照。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基
DMEM高糖(貨號(hào):PM150210)＋0.4mg/ml G418(貨號(hào):PB180125)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢(shì)：
1、細(xì)胞株種類(lèi)齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專(zhuān)業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購(gòu)買(mǎi)本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶(hù)收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問(wèn)題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過(guò)五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過(guò)一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
NADPH氧化酶4抗體 NADPH oxidase 4
脂肪細(xì)胞分化因子24 FAD24
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Z盤(pán)狀蛋白抗體 Nebulette
活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體 NFAT5
磷酸化活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體 phospho-NFAT5 (Ser1197)
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白抗體 Lipocalin 2
2型神經(jīng)纖維瘤抗體 NF2
膜相關(guān)磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 NIR1
納曲酮抗體IgG Natrexone
磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體 Phospho-NDRG1 (Ser330)
磷酸化分化相關(guān)基因NDRG1抗體 Phospho-NDRG1 (Thr346)
泛素連接酶NEDD4-2抗體 NEDD4L
磷酸化2型神經(jīng)纖維瘤抗體 Phospho-NF2(Ser518)
磷酸化*受體1抗體 Phospho-NMDAR1(Ser896)
磷酸化*受體1抗體 Phospho-NMDAR1 (Ser897)
神經(jīng)束蛋白186抗體 Nfasc186
磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體 Phospho-NEDD4L (Ser342)
磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 Phospho-NFKB1 (Ser927)
磷酸化*受體1抗體 Phospho-NMDAR1 (Ser890)
類(lèi)固醇受體激活蛋白2抗體 KAT13C
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體 Nanog
核小體組裝蛋白1抗體 NAP1L1
N-鈣粘附分子抗體 N-cadherin
核受體輔助抑制因子1抗體 NCoR1
腎小球細(xì)胞粘附分子受體抗體 Nephrin
巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體 Nestin
巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體 Nestin
蛋白激酶錨定蛋白抗體 Neurobeachin
*或半*蛋白水解酶抑制蛋白1抗體 Neuroserpin
黑色素瘤*蛋白多糖抗體 NG2
突觸細(xì)胞粘附分子3抗體 Neuroligin 3
跨膜*蛋白聚糖C抗體 Neuroglycan C
神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體 Nova1
NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide syhase-1) 一氧化氮合成酶-1（抗原） 通用型懸鉤子叢矮病毒（Raspberry Bushy Dwarf Virus；RBDV）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Syhase,Inducible 一氧化氮合成酶-2（抗原） 通用型馬鈴薯潛伏性病毒（Red LaSoda Virus；RLaSV/ Potato late Virus）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
Batroxobin 蛇***毒***巴***曲***酶***抗***原 通用型小南瓜花葉病毒（Squash Mosaic Virus；SMV）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS 一氧化氮合成酶-3（抗原） 通用型煙草環(huán)斑病毒（Tobacco Ringspot Virus；TRSV）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
NPY ( Neuropeptide Y) 神經(jīng)肽 Y（抗原） 通用型番茄斑萎病毒（Tomato Spotted Wilt Virus；TSWV）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
NR2B (Glutamate receptor) *受體（抗原） 通用型總番茄斑萎病毒（Total Tospo Virus；TOSPO）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
-3 神經(jīng)生長(zhǎng)因子-3（抗原） 通用型南瓜黃化花葉病毒（Zucchini Yellow Mosaic Virus；ZYMV）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
-4,-5 神經(jīng)生長(zhǎng)因子4/5（抗原） 通用型瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病（西瓜果斑）（Acidovorax avenae subsp. citrulli；Watermelon Fruit Blotch）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
N (Neurturin) 神經(jīng)生長(zhǎng)因子（抗原） 通用型胡蘿卜細(xì)菌性葉斑病（Xahomonas campestris pv. Carotae；Xccar）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原 通用型野油菜黃單胞菌（Xahomonas campestris pv. Pelargonii；Xcp）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
phospha-Bcl-xL (pSer62) peptide (human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) 磷酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原 通用型加拿大低酸菜籽油黑脛病/油菜腐爛病/甘藍(lán)黑莖病菌（Blackleg of Canola/Leptosphaeria maculans/Phoma lingam）基因檢測(cè)試劑盒 0.5mg
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