1.產(chǎn)品名稱：兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法

2.組織來源：視網(wǎng)膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。*神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處zui多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力zui強(qiáng)。視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)通道；主要是由單層色素上皮細(xì)胞所構(gòu)成，排列十分規(guī)則。視網(wǎng)膜色素上皮參與*循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性。細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞分為三部分，即頂部、體部和基底部。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞無再生能力，細(xì)胞死亡后不被替換，而是鄰近的細(xì)胞向側(cè)面滑動(dòng)，以*死亡細(xì)胞遺留下來的空間。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)通道。視網(wǎng)膜色素上皮參與*循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性。

本公司的兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞采用*-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光和Dopa染色鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
A
辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗馬IgG LOX-1/OLR1
*標(biāo)記的兔抗馬IgG LPLUNC1
APC標(biāo)記的兔抗馬IgG LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗馬IgG ACE( ACE, testis-specific isoform precursor)
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgG Integrin alpha E2 peptide
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgG Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗馬IgG Mafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgG MAGE-1
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgG MAPKK1 (MAP kinase kinase 1)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗馬IgG ASK1/MAPKKK5
膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgG Maspin (mammary serine protease inhibitor)
FITC標(biāo)記的兔抗馬IgG Matriptase
羅丹明標(biāo)記的兔抗馬IgG HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene)
PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgG MC-1R (melanocortin-1-receptor)
Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgG Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide
Cy5標(biāo)記的兔抗馬IgG MDR1(multidrug resistance 1)
Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgG MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2)
Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgG Mfn1 (Mitofusin1)
PE標(biāo)記的兔抗馬IgG MT(metallothionein)
羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgG MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)
膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗人IgG MK(Midkine)
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgG MLC/Myosin light chain 3 peptide
REST協(xié)阻抑因子3   48T
COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit  人集蛋白亞家族成員11   48T
Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit  人α1β糖蛋白   48T
sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit  人可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1   48T
MSTN(Human Myostatin) ELISA Kit  人肌抑素   48T
MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit  人黑素瘤衍生*拉鏈額外核因子   48T
UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit  人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4   48T
PPP1R1A(Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A) ELISA Kit  人蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A   48T
ABCG2(Human ATP-binding cassette transporter G2) ELISA Kit  人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2   48T
GDI(Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor) ELISA Kit  人鳥苷酸解離抑制因子   48T
OTF2B(Human octamer transcription factor 2B) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄因子   48T
OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄因子   48T
DUTP(Human deoxyuridinetriphate) ELISA Kit  人脫氧尿三磷酸   48T
CMR(Human costimulatory molecules recptor) ELISA Kit  人協(xié)同刺激分子受體   48T
PG(Human peptidoglycan) ELISA Kit  人肽聚糖   48T
LAM(Human Lipoarabinomannan) ELISA Kit  人脂阿拉伯甘露聚糖   48T
MN(Human Mannose) ELISA Kit  人甘露糖   48T