1.產(chǎn)品名稱：小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞實驗方法
2.組織來源：椎間盤組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環(huán)的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內(nèi)層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。
本公司的小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞采用膠原酶-*聯(lián)合消化法并結合軟骨細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM-F12、FBS、軟骨細胞生長添加劑、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
優(yōu)勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內(nèi)膜細胞等
2、*，專業(yè)的細胞培養(yǎng)技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負責重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Cy7標記的驢抗兔IgG USF-1(upstream stimulatory factor 1)
PE標記的驢抗兔IgG Ubiquitin
PE-Cy3標記的驢抗兔IgG VASH1(Vasohibin 1)
PE-CY5標記的驢抗兔IgG VCAM-1/CD106(Vascular cell adhesion molecule 1 isoform b precusor; CD106 antigen)
APC標記的驢抗兔IgG VCAM-1/CD106 (Vascuolar cell adhesion molecule 1)
Alexa Fluor 350標記的驢抗兔IgG VDAC peptide
羅丹明標記的驢抗兔IgG VEGF
膠體金標記的驢抗兔IgG VEGF-A(Vascuoar endothelial growth factor A)
膠體金標記的驢抗羊IgG VEGF-C(Vascuoar endothelial growth factor-C)
堿性磷酸酶（AP）標記的驢抗羊IgG VEGFR2
羅丹明標記的驢抗羊IgG sVEGFR2
Alexa Fluor 488標記的驢抗羊IgG VEGFR-3/FLt-4
Cy5.5標記的驢抗羊IgG VEGFR-3(Vascular Epidemal growth factor receptor-3)
Cy7標記的驢抗羊IgG VWF (Von Willebrand Factor)
PE標記的驢抗羊IgG Wnt1
PE-Cy3標記的驢抗羊IgG WWOX (WW domain-containing oxidoreductase)
PE-CY5標記的驢抗羊IgG XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein)
APC標記的驢抗羊IgG XAF1(XIAP-associated factor 1)
Cy3標記的驢抗羊IgG XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1)
Alexa Fluor 555標記的驢抗羊IgG ZO-1 peptide
PE-Cy7標記的驢抗羊IgG Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein)
膠體金標記的驢抗豚鼠IgG Angiotensin II receptor(Ang II )
PE-Cy5.5標記的驢抗豚鼠IgG Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC)
ELISA Kit 人11去氫血栓烷B2 48T
Human thrombomodulin,TM ELISA Kit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白 48T
Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit 人纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物 48T
Human plaet membrane glycoprotein II b III a,GP- II b III a ELISA Kit 人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa 48T
Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit 人血小板反應蛋白/*敏感蛋白1 48T
Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit 人血漿α顆粒膜蛋白 48T
Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit 人末端補體復合物C5b-9 48T
Human Complement 4,C4 ELISA Kit 人補體蛋白4 48T
Human Complement 3,C3 ELISA Kit 人補體蛋白3 48T
Human coagulation factor II ,F II ELISA Kit 人*Ⅱ 48T
Human leucocyte antigen B27,HLA-B27 ELISA Kit 人類白細胞抗原B27 48T
Human Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT 人結合珠蛋白/觸珠蛋白 48T
Human 50% complement hemolysis,CH50 ELISA Kit 人血清總補體 48T
Human Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit 人過敏毒素/補體片斷4 48T
Human Complement fragment 5a,C5a ELISA Kit 人補體片斷5a 48T
Human Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit 人補體片斷3a 48T
Human coagulation factor VIII related antigen,F VIII -Ag ELISA Kit 人*Ⅷ相關抗原 48T
