A組輪狀病毒(HRV-A)核酸檢測試劑盒說明書PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

A組輪狀病毒(HRV-A)核酸檢測試劑盒說明書個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
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A組輪狀病毒(HRV-A)核酸檢測試劑盒說明書1、什么是定量PCR？
以參照物為標準，對PCR終產(chǎn)物進行分析或?qū)?/span>PCR過程進行監(jiān)測，從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù)，稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數(shù)期進行的。
2、定量PCR定量的理論依據(jù)是什么？
特定的待擴增基因片段起始含量越大，則指數(shù)擴增過程越短，當擴增速率趨于穩(wěn)定后，則無論原來樣品中起始模板含量多少，終擴增片段的含量通常是一樣的。
理想的擴增結(jié)果：Y=X×2n 其中Y代表擴增產(chǎn)物量， X代表PCR反應(yīng)體中的原始模板數(shù) n為擴增次數(shù)；理論上PCR擴增效率為*，PCR產(chǎn)物隨著循環(huán)的進行成指數(shù)增長，但實際上：DNA的每一次復(fù)制都不*，即每一次擴增中，模板不是呈2的倍增長；實際應(yīng)為：Y= X(1+E)n ，其中E 代表擴增效率：E = 參與復(fù)制的模板/總模板，通常E≤1，E在整個PCR擴增過程中不是固定不變的。通常X 在 1～105拷貝、循環(huán)次數(shù)n≤30時，E 相對穩(wěn)定，原始模板以相對固定的指數(shù)形式增加，適合定量分析，這也就是所謂的指數(shù)期；隨著循環(huán)次數(shù)n的增加（>30次），E值逐漸減少，Y 呈非固定的指數(shù)形式增加，后進入平臺期。
3、熒光定量PCR定量的理論模式又是什么？
PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程，任何干擾PCR指數(shù)擴增的因素都會影響擴增產(chǎn)物的量，使得PCR擴增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個固定的比例關(guān)系，通過檢測擴增終產(chǎn)物很難對原始模板進行準確定量。近年來研究人員通過大量的實踐，研究了相對準確的定量PCR方法，即熒光定量PCR。
PCR擴增通式： ① Tn=T0（1+E）n
② Tn=Tn-1（1+E）n 注：[0
其中E表示擴增效率，n為循環(huán)數(shù)，Tn表示在n個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，Tn-1表示在n-1個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量，T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達指數(shù)擴增期時，產(chǎn)生一定的熒光(熒光依賴于某一循環(huán)擴增產(chǎn)物的總量，即特定的拷貝數(shù)K，為常數(shù)，大約在1010左右)高于背景為儀器所識別，此時的循環(huán)數(shù)為CP（crossing point）,也就是K= T0（1+E）CP，取對數(shù)即：
lg K=lg T0+CP*lg(1+E)
CP=- 1/lg(1+E)*lg T0 +lgk/lg(1+E)
由于對一特定的PCR而言，E與K均為常數(shù)，故上式為循環(huán)數(shù)（CP）對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)（lg T0）一次方程，其標準形式y=kx+b,該直線的斜率為- 1/lg(1+E)，在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E)，也是熒光定量PCR所謂的標準曲線。例如下圖為單管實時熒光定量RT-PCR的標準曲線：
A組輪狀病毒(HRV-A)核酸檢測試劑盒說明書目前熒光定量PCR均采用外標定量
外標法定量PCR擴增效率的計算，由于標準曲線的斜率(Slope)為- 1/lg(1+E)，可知E=10-1/Slope-1 ,如從標準曲線中知道Slope=-3.337,則可推知擴增效率E=101/3。337-1=0.99,也有作者將(1+E)直接視為擴增效率E，則E=10-1/Slope，求得的E值均在1—2之間，有時也有大于2的結(jié)果，如下圖所示。另外也可直接根據(jù)系列稀釋外標在該次實時熒光PCR的結(jié)果來大略分析擴增效率的高低，例如系列10倍稀釋外標在PCR擴增時有N2=N0En2, N3=(10*N0)En3,在擴增到指數(shù)期時熒光值相同則代表此點的終末拷貝數(shù)相同，即N2=N3，En2-n3=10,取對數(shù)得到⊿ngE=1, E=101/⊿n，E=2，⊿n=3.32; E=1.8，⊿n=3.91.反之亦然。
根據(jù)PCR擴增過程中是否加入某種標記物、標記物的種類以及后檢測的信號的不同可分為四種類型：①直接定量檢測法， ②同位素標記定量，③酶標記定量檢測法，④熒光定量PCR技術(shù)
熒光定量PCR 主要原理發(fā)射波長與受體熒光染料光染料吸收供體熒光傳遞的能量而激發(fā)出另一波長的熒光，同時將供體熒光淬滅。SYBR Green I 檢測模式
SYBR Green I 是一種能與雙鏈DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光大增強。因此， SYBR Green I的檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長大約為520nm。PCR擴增程序一般為94℃～55℃～72℃三步法，40個循環(huán)。
SYBR Green I 的缺點：由于SYBR Green I沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對PCR反應(yīng)中的非特異性擴增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。 SYBR Green I的優(yōu)點：SYBR Green I的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。
5、為什么要用熒光定量PCR技術(shù)進行定量？它與傳統(tǒng)的定量PCR有什么不同？
如前所述的，傳統(tǒng)的定量PCR有很多，主要是倍比稀釋法、內(nèi)參照法、競爭法、PCR-ELISA法，但這些定量PCR技術(shù)的難點主要在于：（1）如何確定PCR正處于線性擴增范圍內(nèi)（只有在此范圍內(nèi)PCR產(chǎn)物信號才與初始模板的拷貝數(shù)成比例）。（2）一旦線性擴增范圍確定以后，如何找到一個合適的方法檢測結(jié)果。為了保證線性，研究者要擴增一系列梯度稀釋的cDNA或者對每個基因的擴增循環(huán)數(shù)作適當?shù)恼{(diào)整；有的研究者加一個競爭性模板，有的做限制性的稀釋梯度分析，或者加一個PCR模擬（mimic）反應(yīng)，即用相似的引物與目標產(chǎn)物共擴增，而擴增產(chǎn)物的檢測通常在跑膠以后通過染料、放射活性或者探針進行檢測。（3）大多數(shù)是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異（如下圖所示），因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量；雖然加入內(nèi)標后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法，所以傳統(tǒng)定量PCR的缺點是：勞動強度大、定量不準確、重復(fù)性差。
滇雞血藤 The Yunnan Caulis Spatholobi 2g

注:(刺五加葉中)Notq:(ofcccnthopcncxlqcf)3684-77-HPLC≥98%，20mg/vial

α-常春藤皂苷 α-hederin 27013-91-8 HPLC≥98% 20 mg/支

輔酶Q10303-98-0Coenzyme Q10

人參皂苷F2;人參皂甙F2 Ginsenoside F2 62025-49-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

NA 細菌內(nèi)毒素工作標準品 10支/盒

豨薟Siegesbeckia orientalis 16-鄰乙酰基豨薟精醇 1188282-01-0 C22H36O4 ≥95% 紫堇減0 8055

Yucalexin P-17 119642-82-9

Mycopxenolate Mofetil *標準品128794-94-5 200mg*標準品

3,′6-二芥子酰基蔗糖 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

萊苞迪甙D Rebaudioside D 分 子 量：1129.1500 CAS編號：63279-13-0 分子式：C50H80O28 別　　名：瑞鮑迪甙D 基本用途：含量測定。

小葉藤黃Garcinia cowa O-Demetxylforbexanthone 7,9,12-三輕基-2,2-二甲基-2H,6H-并[3,2-B]氧雜意-6-同 92609-77-3 C18H14O6 右旋香芹同(5926

含量測定對二錄本111682-200401常溫，避光100mg

metxicillin wo7ium (AS)*標準品7246-14-2 500mg

半邊旗Pteris semipinnata Heveaflavone 三葉橡膠黃酮 23132-13-0 C33H24O10 ≥98%

四號瓊脂基礎(chǔ)/四號瓊脂/NO.4AgarBase霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  不產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces achromogenes

溶血瓊脂基礎(chǔ)鼠疫桿菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  戴爾根霉

葡萄糖肉浸液肉湯/DextroseMeatInfusionBroth用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  長柄木霉

腦浸粉（牛）/牛腦浸粉/牛腦提取物/BraininfusionpowderBR250克國產(chǎn)/進口  進口分裝  白靈側(cè)耳 Pleurotus rodensis

乳酸桿菌選擇性肉湯  進口分裝  L-精酸(標準品）  L-Arginine  CAS號：  74-79-3  質(zhì)量規(guī)格：  HPLC≥98%，標準品

UVM培養(yǎng)基  進口分裝  *（還原型）  Glutathione (Reduced);GSH  CAS號：  70-18-8  質(zhì)量規(guī)格：  >98%,BR

吖啶黃素（3.0mg）3.0mg/支*5  進口分裝  N-乙酰-L-丙酸  N-Acetyl-L-phenylalanine  CAS號：  2018-61-3  質(zhì)量規(guī)格：  >99%,B

A組輪狀病毒(HRV-A)核酸檢測試劑盒說明書人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   甜橙黃  英文名稱：  Sinensetin  CAS號：  2306-27-6  分子式：  372.39  分子量：  C20H20O7

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   土貝母苷甲  英文名稱：  Tubeimoside  CAS號：  102040-03-9  分子式：  1319.43  分子量：  C63H98O29

人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   土大黃苷  英文名稱：  Soil rhubarb  CAS號：  155-58-8  分子式：  420.41  分子量：  C21H24O9

人可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  進口分裝   土荊皮乙酸  英文名稱：  Soil Jing acid  CAS號：  82508-31-4  分子式：  432.464  分子量：  C23H28O8