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技術文章

濕色培養基使用前處理

閱讀:150發布時間:2018-5-21

濕色培養基使用前處理:   
1. 把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。   
2. 在大體積的2%(W/V)*和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。   
3. 用蒸餾水*清洗透析袋。 
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。   
5. 冷卻后,存放于4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋是必須戴手套。   
6. 用前在透析袋內裝滿水然后排出,將之清洗干凈。
實驗方法
(1)無菌條件下剔除壞死及非腫瘤組織,用Hanks液沖洗1次。
(2)用下述方法之一將腫瘤組織分散為單細胞:
1)機械分散法:充分剪碎腫瘤組織,經100目和200目不銹鋼網擠壓過濾,收集細胞。
2)酶消化分散法:充分剪碎腫瘤組織,首先經o.1%膠原蛋白酶37℃下消化20min,再用O.25%*一O.02%EDTA混合液(1:1)37℃下消化,收集細胞。
(3)將分散的細胞懸液加入含100%和75%淋巴細胞分離液的梯度離心管中,2000r/min離心20min,吸取zui上層(75%分離液的界面上)的腫瘤細胞。
(4)用Hanks液離心洗滌2次,棄上清液,加入適量培養液重新懸浮細胞。
(5)立即將腫瘤細胞懸液以每孔103~104個細胞接種于96孔培養板(200μl/孔),同時加入事先確定濃度梯度的各組抗癌藥10μl/孔(對照組加入培養液10μl/孔)。在37℃、5%CO2孵箱中培養48~72h(培養時間取決于實驗的目的和要求)。
(6)每孔加入MTT(5mg/m1)20μl,37℃作用4h。
(7)小心吸棄各孔內的上清液,對于懸浮生長的細胞需1000r/min離心5min,然后再吸棄上清液。每孔加入DMSO 150μl,振蕩,使紫藍色沉淀充分溶解,用酶標儀在波長450~600nm處測定吸光度A值。
(8)各藥物濃度組設3個平行孔,實驗重復3次,取平均值計算藥物作用后腫瘤細胞生長抑制率。
濕色培養基凝聚素(CLU)ELISA試劑盒 ,英文名: CLU ELISA Kit

凝膠原蛋白(gelson)ELISA試劑盒 ,英文名: gelson ELISA Kit

尿腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)ELISA試劑盒 ,英文名: TRAIL-DR4 ELISA Kit

尿游離*(UFC)ELISA試劑盒 ,英文名: UFC ELISA Kit

尿微量白蛋白(MAU/ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU/ALB ELISA Kit

尿微量白蛋白(MAU)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU ELISA Kit

尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: ALB ELISA Kit

尿素酶相關蛋白C(UreC)ELISA試劑盒 ,英文名: UreC ELISA Kit

*核苷磷酸化酶1(UPP1)ELISA試劑盒 ,英文名: UPP1 ELISA Kit

*型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA ELISA Kit

*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 ,英文名: PLAUR/uPAR ELISA Kit

*型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA/PLAU ELISA Kit

*型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA ELISA Kit

*型纖溶酶原激活劑受體(uPAR)ELISA試劑盒 ,英文名: uPAR ELISA Kit

*(UK)ELISA試劑盒 ,英文名: UK ELISA Kit

尿肌酐(UCR)ELISA試劑盒 ,英文名: UCR ELISA Kit

尿苷二磷酸葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移酶(UGCG)ELISA試劑盒 ,英文名: UGCG ELISA Kit

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶2(UGT2)ELISA試劑盒 ,英文名: UGT2 ELISA Kit

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶1(UGT1)ELISA試劑盒 ,英文名: UGT1 ELISA Kit

尿蛋白(UP)ELISA試劑盒 ,英文名: UP ELISA Kit

尿17羥皮質類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒 ,英文名: 17-OHCS ELISA Kit濕色培養基

 

 


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