重組人胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素細(xì)胞因子
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注意事項：1. ELISA用的所有液體系統(tǒng)，記得一定要預(yù)先調(diào)PH值到7.2-7.4之間，按照說明書都無菌過濾過.1XPBS的PH值在7.68左右，仍然需要加鹽酸調(diào)酸一點.Trizma base配出來，PH在9.98,必須調(diào)PH!否則ELISA中抗原抗體根本不能正常結(jié)合.蛋白對于PH值極度敏感.2. 無菌要求多高，現(xiàn)在不知道.建議無菌配好的液體放在4度冰箱保存.每次用之前，放在室溫下至少15分鐘.ELISA用的液體，室溫的溫度，效果比較好.洗包被液的時候，直接把板子翻過來，棄掉液體.在厚厚的吸水紙上，用力拍打板子，力求把孔中的液體*棄干凈.用WASH BUFFER洗滌三次.因為孔的容量是400UL,但是300UL基本就可以把孔覆蓋滿.所以，建議洗板子的時候，每孔加350ul左右.注意事項：1.每次洗滌的時候，盡量拍干孔中液體.這樣洗滌得比較干凈.2. 孔中沒有液體時候，動作一定要快！！！ELISA包被后的孔，不能干掉！否則非常影響結(jié)果.3.封閉.用是1%BSA in 1XPBS. 無菌過濾，4度保存，用之前放在室溫復(fù)溫.封閉液可以封閉全孔，所以每孔加300UL封閉液，室溫1小時.4. 棄掉封閉液，拍干.洗滌三遍.步驟如前.5. 加標(biāo)準(zhǔn)品和樣品.標(biāo)準(zhǔn)品儲存濃度很高，而且蛋白很忌反復(fù)凍融.建議次使用時，分裝.可以48孔一只，-80度冰箱保存，可以有效保存半年.4度保存，有效期是60天，而且濃度會衰減.取16孔標(biāo)準(zhǔn)品的量.舉例，我的標(biāo)準(zhǔn)品儲存濃度是270ng/ml, 標(biāo)準(zhǔn)品分7個點，濃度是1000pg/ml，每孔100ul, 2倍遞減，所以是1000， 500， 250， 125， 62.5 ， 31.2， 15.6 pg/ml, 7個孔我需要0.2ng標(biāo)準(zhǔn)品.做ELISA必須有復(fù)孔.所以，兩排14個孔我需要0.4ng標(biāo)準(zhǔn)品, 1.5ul.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋步驟：取7個EP管，第1管放400ul緩沖液，第2到7管放200ul緩沖液.將1.5ul標(biāo)準(zhǔn)品加入到管中，200ul槍輕輕吹打混勻.從第1管中取200ul加入第2管中，吹打均勻.依次稀釋.第7管有400ul液體，zui后只用200ul.標(biāo)準(zhǔn)品加樣步驟：從第1管中取100ul加到A1孔，再100ul加到A2復(fù)孔中.第2到7孔，參考上述步驟.第8孔，H1和H2加沒有標(biāo)準(zhǔn)品的緩沖液，作為陰性對照.樣本加樣：血清或者細(xì)胞上清，解凍之后混勻，建議3000RPM離心10分鐘，沉淀液體中的固體雜質(zhì).按照順序，每孔加100ul樣本，記得做復(fù)孔.加樣體積一定要一樣，但是動作要快.樣本還是一定要保證加到管底，不要粘附到管壁上.標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，每孔100ul，室溫孵育2小時.6. 棄掉液體，拍干.洗滌3遍.7. 加檢測抗體（detection antibody,尾端有*biotin），每孔100ul（儲存液也是放-80度，用之前解凍后加緩沖液混勻，稀釋到工作濃度，緩沖液的PH值都已經(jīng)調(diào)到7.2-7.4之間）.室溫孵育2小時.備注：以上這些步驟沒有要求避光.所以，每次加樣之后，只要保證把貼膜都貼牢，防止液體蒸發(fā)和孔間干擾即可.板子可以放在操作臺上.不過因為操作習(xí)慣，即使不避光的步驟，也可以把板子放在室溫的抽屜里.8.棄掉檢測抗體液，拍干.洗滌三遍.9. 加Streptavidin-HRP(親和素-辣根過氧化物酶)，這個一直4度保存，使用的時候200倍稀釋（96孔，9.6ML液體，加48ul的Streptavidin-HRP，9552ul的緩沖液）.100ul每孔，室溫，避光（這步開始要避光），孵育20分鐘.10. 棄掉液體，拍干.洗滌三遍.11. 加底物液（substrate solution）,A液：B液=1:1，用之前臨時混起來.儲存的時候A，B兩液分別儲存在4度冰箱.每孔100ul（等于每孔A液50ul，B液50ul），室溫，避光，20分鐘.
人Neuroserpin（Human Neuroserpin）
人NOGGIN（Human NOGGIN）
人NOGGIN（Human NOGGIN）
人NOV基因（Human NOV）
人OTOR （Human OTOR）
人p16-INK4a (Recombinant Human p16-INK4a)
人PAI-2/Recombinant Human PAI-2
人Prokineticin-2（Human Prokineticin-2）
人sDLL-4(Human sDLL-4)
人sFRP蛋白-1 Human Secreted Fri
會員1.png)
