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上海邦景實業有限公司
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ECL 法*雜交檢測試劑盒5次實驗步驟運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
ECL 法*雜交檢測試劑盒5次實驗步驟使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
ECL 法*雜交檢測試劑盒5次實驗步驟磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
植物種屬鑒定 PCR Mix 2 100 次 十六烷基*基*
植物種屬鑒定 PCR Mix 3 100 次 尿素
植物種屬鑒定 PCR Mix 4 100 次 戊*鈉
植物種屬鑒定 PCR Mix 5 100 次 剛果紅
植物種屬鑒定 PCR Mix 6 100 次 DEAE 瓊脂糖凝膠 6B
植物種屬鑒定 PCR Mix 7 100 次 D- 果糖
植物種屬鑒定 PCR Mix 8 100 次 蔗糖
植物種屬鑒定 PCR Mix 9 100 次 *
植物種屬鑒定 PCR Mix 10 100 次 L- 天*
植物種屬鑒定 PCR Mix 11 100 次 9,10- 二甲基 -1,2 苯并蒽
轉 ESPES 基因植物 PCR Mix 100 次 β －萘乙酸
轉 ESPES-NOs 基因植物 PCR Mix 100 次 維生素 B6
轉 Lectin 基因植物 PCR Mix 100 次 嘌呤霉素鹽酸鹽
真菌種屬鑒定 PCR Mix 1 100 次 腺苷
3-Iodobenzoicacid間碘苯酸1克高純，99%
刀豆素A，英文名或英文縮寫：Concanamycin A，級別：BR，150-250u/mg，規格：10毫克
3,5-Diiodo-L-thyronine3,5-二碘甲腺原氨酸100克BR，99%
組蛋白，英文名或英文縮寫：Histone，級別：BR，15-25u/mg，芬末，規格：100克
2-Nitroso-1-naphtholβ-亞硝基-α-奈酚500克CP，98%
*鋅，英文名或英文縮寫：Bacitracin zinc，級別：BR，200u/mg，響尾蛇毒液，規格：25克
2-FDU2'-脫氧-2'-氟尿苷5克特純，99%
制真菌素，英文名或英文縮寫：Nystatin，級別：BR，魚鱗提取，規格：250毫克
或英文縮
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