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上海邦景實業有限公司
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DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法產品介紹：
DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
PotatoDextroseWater
WS瓊脂 250(g) incubation media WS瓊脂 250(g)
10% NaC1胰胨水發酵管 10% NaC1胰胨水發酵管 20支 BR
啤酒檢驗系列incubationmedia啤酒檢驗系列
波爾頓選擇性增菌肉湯 250g 用于彎曲桿菌選擇性增菌培養
綜合馬鈴薯培養基250g用于真菌的分離培養
葡萄糖銨培養基 250(g) incubation media 葡萄糖銨培養基 250(g)
山梨酸發酵管 山梨酸發酵管 20支 BR
MRS瓊脂基礎250用于食品中乳酸菌總數測定incubationmediaMRS瓊脂基礎250用于食品中乳酸菌總數測定
BoltonSelectiveEnrichmentbroth
IntergratedPotatoMedium
葡萄糖半固體培養基 250(g) incubation media 葡萄糖半固體培養基 250(g)
木糖發酵管 木糖發酵管 20支 BR
UBA培養基250用于啤酒中厭氧菌檢測incubationmediaUBA培養基250用于啤酒中厭氧菌檢測
CCDA基礎 250g 用于彎曲桿菌分離培養(WHO方法)
沙氏葡萄糖肉湯(SDB)250g用于霉菌和酵母菌的增菌培養
動力-吲哚-尿素培養基基礎(MIU) 250(g) incubation media 動力-吲哚-尿素培養基基礎(MIU) 250(g)
鼠李糖發酵管 鼠李糖發酵管 20支 BR
NBB培養基250用于啤酒中厭氧菌檢測incubationmediaNBB培養基250用于啤酒中厭氧菌檢測
CCDABase
SabouraudDextroseBroth
SIM培養基 250(g) incubation media SIM培養基 250(g)
棉子糖發酵管 棉子糖發酵管 20支 BR
Raka-Ray培養基250用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養incubationmediaRaka-Ray培養基250用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養
CCDA添加劑 2ml*5支 每支添加于200mlCCDA基礎中
DNA 5’末端標記試劑盒10 次實驗方法〖級別〗：AR
〖含量〗：≥98.0%
〖熔點〗：68～70℃
乙醇溶解試驗：合格
〖灼燒殘渣〗：≤0.1%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：無色斜方或長方晶體或粉末。有香莢蘭豆香，有灼燒味，味苦。溶于乙醇、乙迷、氯方、揮發油和氫氧化堿溶液中，微溶于沸水?！枷鄬γ芏取?d204)0.935。〖熔點〗68～70℃。沸點297～299℃。閃點162℃。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)熒光指示劑。
〖保存〗：RT，避光
酸性偶氮紅
〖英文名稱〗：Azophloxine；Acid Red 1；Disodium 5-acetylamino-4-hydroxy-3-(phenylazo)naphthalene-2,7-disulphonate
〖其他名稱〗：偶氮熒光桃紅；偶氮焰紅；酸性紅1；食品紅10；5-(乙酰基氨基)-4-羥基-3(苯基偶氮)-2,7-萘二磺酸二鈉鹽；酸性紅G；酸性大紅G；偶氮螢光桃紅；8-乙酰氨基-2-苯偶氮基-1-萘酚基-3,6-二磺酸二鈉鹽
〖CAS號〗：3734-67-6
C18H13N3Na2O8S2=509.42
reen；4,4′
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