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上海邦景實業有限公司
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TdT 加尾法 DNA 標記試劑盒5次實驗方法運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
TdT 加尾法 DNA 標記試劑盒5次實驗方法使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
TdT 加尾法 DNA 標記試劑盒5次實驗方法產品介紹：
磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
沉降菌測試培養基
亞碲酸鹽卵黃增菌液 5mL/支×10(g) incubation media 亞碲酸鹽卵黃增菌液 5mL/支×10(g)
3% NaC1*脫羧酶發酵管 3% NaC1*脫羧酶發酵管 20支 BR
磷酸鹽葡萄糖胨水培養基250用于甲基紅試驗incubationmedia磷酸鹽葡萄糖胨水培養基250用于甲基紅試驗
TTC
沙氏瓊脂培養基(SDA)250g用途：用于醫藥工業潔凈室(區)沉降菌的測試(GB/T
凍干血漿 0.5mL/支×10(g) incubation media 凍干血漿 0.5mL/支×10(g)
3.5% NaC1*脫羧酶發酵管 3.5% NaC1*脫羧酶發酵管 20支 BR
甲基紅指示劑盒基紅試驗配套試劑incubationmedia甲基紅指示劑盒基紅試驗配套試劑
波爾頓選擇性增菌肉湯添加劑 2ml*5 每支添加于225mlHB0273中
SabouraudsAgar
DNA酶瓊脂 100(g) incubation media DNA酶瓊脂 100(g)
*脫羧酶對照發酵管 *脫羧酶對照發酵管 20支 BR
胰蛋白胨水培養基250用于靛基質試驗incubationmedia胰蛋白胨水培養基250用于靛基質試驗
BoltonSelectiveEnrichmentbrothadditive
大豆酪蛋白瓊脂培養基(TSA)于醫藥工業潔凈室(區)沉降菌的測試(GB/T-2010)
7.5%鈉肉湯 250(g) incubation media 7.5%鈉肉湯 250(g)
3% NaC1*脫羧酶發酵管 3% NaC1*脫羧酶發酵管 20支 BR
Kovacs氏靛基質試劑盒2用于吲哚(靛基質)試驗配套試劑incubationmediaKovacs氏靛基質試劑盒2用于吲哚(靛基質)試驗配套試劑
改良CCD瓊脂添加劑 1ml*5 用于添加100ml HB0274-1中
TryptoseSoyaAgar
7.5%鈉肉湯 1000(g) incubation media 7.5%鈉肉湯 1000(g)
3.5% NaC1*脫羧酶發酵管 3.5% NaC1*脫羧酶發酵管 20支 BR
ASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(WHO方法)incubationmediaASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(WHO方法)
CCDAgarAdditive
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，用于結核桿菌染色和其他抗酸性桿菌染色。
〖保存〗：RT，避光
亮藍
〖英文名稱〗：Erioglaucine disodium salt；Acid Blue 9；Alphazurine FG；C.I. Food Blue 2；C.I. 42090
〖其他名稱〗：酸性藍9；罌紅二鈉鹽；雙[4-（N-乙基-N-3-磺酸苯甲基）氨基苯基]-2-磺酸甲苯基二鈉鹽；食品藍1；羊毛罌紅A；C.I.食品藍2(42090)；藍色1號；亮藍1
〖CAS號〗：3844-45-9
C37H34Na2N2O9S3=792.85
〖級別〗：BR
〖含量〗：≥85.0%
λmax：625～630nm
=358.37
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