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原代細(xì)胞操作步驟

閱讀:84發(fā)布時間:2017-07-28

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原代細(xì)胞操作步驟:
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為9mmol/L,6 mmol/L,3 mmol/L,1.5mmol/L, 0.75 mmol/L)。
2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
原代細(xì)胞HBMEC    人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HBVSMC    人腦血管平滑肌細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HBVSMC    人腦血管外膜成纖維細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HBVP    人腦血管周細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HCPEC    人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HCPEpiC     人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HCPF    人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HMC    人腦膜細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HM    人神經(jīng)細(xì)胞    1 x 10^6 cells/vial
HN    人神經(jīng)細(xì)胞    5 x 10^6 cells/vial
HN    人神經(jīng)細(xì)胞    10 x 10^6 cells/vial
HCGC    人小腦顆粒細(xì)胞    1 x 10^6 cells/vial
HN-h    人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞    1 x 10^6 cells/vial
HOPC    人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-貼壁生長    1 x 10^6 cells/vial
HOPC-os    人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長    5 x 10^6 cells/vial
HO    人少突膠質(zhì)細(xì)胞    1 x 10^6 cells/vial
HA    人星形膠質(zhì)細(xì)胞    1 x 10^6 cells/vial
HA    人星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^6 cells/vial
HA    人星形膠質(zhì)細(xì)胞    10 x 10^6 cells/vial
HA-c    人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HA-sp    人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HA-h    人海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HA-bs    人腦干星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HA-mb    人中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HRA    人視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HM    人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HSC    人雪旺細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HPC    人神經(jīng)束膜細(xì)胞    5 x 10^5 cells/vial
HDMEC    人微血管內(nèi)皮細(xì)胞-成人    5 x 10^5 cells/vial原代細(xì)胞

 


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