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技術(shù)文章

原代細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果

閱讀:257發(fā)布時(shí)間:2017-2-27

原代細(xì)胞培養(yǎng)原理:細(xì)胞培養(yǎng)是模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件,將細(xì)胞從機(jī)體中取出,在人工條件下使其生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。近年來(lái),廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等領(lǐng)域,發(fā)展成一種重要生物技術(shù),并取得顯著成就。由體內(nèi)直接取出組織或細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)細(xì)胞離體時(shí)間短,性狀與體內(nèi)相似,適用于研究。
操作:1.取材 用頸椎脫位法使乳兔迅速死亡。然后,把整個(gè)動(dòng)物浸入盛有75%乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒,取出后放在大平皿中攜入超凈臺(tái)。用消過(guò)毒的剪刀剪開(kāi)用碘酒和乙醇再次消毒后的皮膚,剖腹取出肝臟或腎臟。置于無(wú)菌平皿中。
2.切割 用滅菌的PBS液將取出的臟器清洗三次,然后用眼科*刀仔細(xì)將組織反復(fù)剪碎,直到成1mm3左右的小塊,再用PBS清洗,洗到組織塊發(fā)白為止。移入無(wú)菌離心管中,靜置數(shù)分鐘,使組織塊自然沉淀到管底,棄去上清。
3.消化、接種培養(yǎng) 吸取0.25%*一0.02%EDTA混合消化液1ml,加入離心管中,與組織塊混勻后,加上管口塞子,37℃水浴中消化8~10分鐘,每隔幾分鐘搖動(dòng)一下試管,使組織與消化液充分接觸,靜止,吸去上清,向離心管中加入5~10ml含5%小牛血清的MEM培養(yǎng)基,用吸管吹打混勻,移入二個(gè)培養(yǎng)瓶中,置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
原代細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果:細(xì)胞接種后一般幾小時(shí)內(nèi)就能貼壁,并開(kāi)始生長(zhǎng),如接種的細(xì)胞密度適宜,5天到一周即可形成單層。
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原代細(xì)胞

 


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