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中國倉鼠肺細胞；CHL使用說明書

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更新時間：2017-02-13 10:05:55瀏覽次數(shù)：435次

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產(chǎn)品簡介

中國倉鼠肺細胞；CHL使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	中國倉鼠肺細胞；CHL使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 中國倉鼠肺細胞；CHL使用說明書
形態(tài)特性   成纖維細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   廣泛應(yīng)用于染色體異常測試。
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:3。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
人*-半*連接酶調(diào)節(jié)亞基(GCLM)免疫試劑盒   Human GCLM ELISA Kit
人*[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)抗體免疫試劑盒   Human NR-2 Antibody ELISA Kit
人*[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)免疫試劑盒   Human NR-2 ELISA Kit
人孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒   Human orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)免疫試劑盒   Human Lebtospira IgM ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒   Human Leptospira IgG ELISA Kit
人弓蛔蟲(Tc)抗體(IgG)免疫試劑盒   Human Tc IgG ELISA kit二異丙酰胺鋰溶液(+4℃)   Lithium diisopropylamide   4111-54-0
二正丙胺   Dipropylamine   142-84-7
二棕櫚酰-L-a-磷脂酰乙醇胺   1,2-DIPALMITOYL-SN-GLYCERO-3-PHOSPHOETHANOLAMINE   923-61-5
法尼醇   FARNESOL   4602-84-0
釩標(biāo)準(zhǔn)溶液   Vanadium standard solution, 1 mg/ml V(3+) in 2% HNO3, for AAS
富馬酸;反丁烯二酸;;紫堇酸;1，2-乙烯二羧酸   FuMaric Acid;Boletic acid;Lichenic acid;trans-1,2-Ethylenedicarboxylic acid   110-17-8
反丁烯二酸二丁酯   Dibutyl fumarate   105-75-9
反式-1，2-環(huán)己二胺四乙酸   TRANS-1,2-DIAMINOCYCLOHEXANE-N,N,N',N'-TETRAACETIC ACID MONOHYDRATE   125572-95-4
反式-9-（β-D-呋喃核糖玉米素）（-20℃）   trans-Zeatin-riboside   6025-53-2