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大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A使用說明書

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-02-13 08:58:54瀏覽次數(shù):239次

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產(chǎn)品簡介

大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細(xì)胞名稱  大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A使用說明書
形態(tài)特性  
生長特性  貼壁生長
特征特性   這個細(xì)胞株的無血清條件培養(yǎng)基是MSA的一個來源,MSA多肽家族能夠部分滿足雞胚成纖維細(xì)胞對血清的需求。 
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況  PN
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陽性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  B類

產(chǎn)品名稱大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A使用說明書
貨期3-5天
發(fā)貨地上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn): 
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
N-CBZ(β)甘氨酰-L-*    N-Glycyl-L-leucine    869-19-2
N-苯基代    N-Phenylanthranilic acid    91-40-7
N-苯甲酰-DL-*-4-硝基苯胺鹽酸鹽(-20℃)    NA    
N-苯甲酰基-L-*乙酯鹽酸鹽    Ethyl N-benzoyl-L-argininate hydrochloride    2645/8/1
N-芐氧羰基-L-*    N-Carbobenzyloxy-L-alanine    1142-20-7
N-芐氧羰基-L-*    N-Carbobenzyloxy-L-glutamine    2650-64-8
N-芐氧羰基-L-*    Nalpha-Cbz-L-Arginine    1234-35-1
N-芐氧羰基-L-*    N-Cbz-L-Serine    1145-80-8
N-芐氧羰基-L-天冬堿    N-Benzyloxycarbonyl-L-asparagine    2304-96-3
正丁基二乙醇胺    2,2'-(Butylimino)diethanol    102-79-4
甘氨酰*;甘勝;雙甘氨肽;一縮二氨基乙酸    Glycylglycine;Diglycine    556-50-3
*    MegluMine (AS)    6284-40-8人抗蘇氨酰基tRNA合成酶,線粒體(TARS2)抗體免疫試劑盒    Human anti threonyl-tRNA synthetase, mitochondrial(TARS2)antibody ELISA kit
人抗蘇氨酰基tRNA合成酶,細(xì)胞質(zhì)(TARS)抗體免疫試劑盒    Human anti threonyl-tRNA synthetase, cytoplasmic(TARS)antibody ELISA kit
人抗雙載蛋白(AMPH)抗體免疫試劑盒    Human anti amphiphysin(AMPH)antibody ELISA kit
人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)IgG免疫試劑盒    Human anti-double stranded DNA,dsDNA IgG ELISA KIT
人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA(dsDNA)抗體(IgM)免疫試劑盒    Human anti-double stranded DNA(dsDNA)antibody(IgM)ELISA Kit
人抗生長激素(GH)抗體免疫試劑盒    Human anti-growth hormone(GH)antibody ELISA Kit

 

 


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