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小鼠雜交瘤細(xì)胞；3H8H10培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

小鼠雜交瘤細(xì)胞；3H8H10培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細(xì)胞；3H8H10培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；3H8H10培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性半貼壁生長(zhǎng)
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C30
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒   Mouse substance P receptor,SP-R ELISA Kit
小鼠P物質(zhì)(SP)免疫試劑盒   Mouse Substance P,SP ELISA Kit
小鼠P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)免疫試劑盒   mouse permeability glycoprotein,P-gp ELISA Kit
小鼠p53(p53)免疫試劑盒   Mouse p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
小鼠opiorphin 免疫試劑盒   Mouse opiorphin ELISA kit
小鼠N-乙?；?絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴氨酰-*(AcSDKP)免疫試劑盒   Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKP ELISA Kit
小鼠L-乳酸脫氫酶A鏈(LDH-A)免疫試劑盒   Mouse L-lactate dehydrogenase A chain,LDH-A ELISA Kit
小鼠L苯*解氨酶(PAL)免疫試劑盒   Mouse L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit白蛋白測(cè)試盒（溴甲酚綠法）   shēng huà shì jì   容量：   RT   96支/盒
阿糖胸苷   shēng huà shì jì   容量：   RT   10克
阿糖腺苷   shēng huà shì jì   容量：   RT   10克
阿糖尿苷   shēng huà shì jì   容量：       100克
阿糖胞苷   shēng huà shì jì   容量：       25克
阿斯巴甜   shēng huà shì jì   容量：   RT   5克
*檢定培養(yǎng)基   shēng huà shì jì   容量：       500克/包
阿拉西A   shēng huà shì jì   容量：       500克
γ-L-谷氨酰對(duì)硝基苯胺一水合物   shēng huà shì jì   容量：       1公斤
γ-L-谷氨酰-β-萘酰胺   shēng huà shì jì   容量：       100克