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小鼠雜交瘤細(xì)胞；4G10培養(yǎng)

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更新時間：2017-02-10 09:54:19瀏覽次數(shù)：225次

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細(xì)胞；4G10培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細(xì)胞；4G10培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 小鼠雜交瘤細(xì)胞；4G10培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C25
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
小鼠β1腎上腺素能受體(β1AR)抗體免疫試劑盒   Mouse anti-β1-adrenergic receptor(β1AR)antibody ELISA kit
小鼠α羥基丁酸脫氫酶(αHBDH)免疫試劑盒   Mouse α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase,αHBDH ELISA Kit
小鼠α1干擾素(IFN-α1)免疫試劑盒   Mouse Interferon α1,IFN-α1 ELISA Kit
小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒   Mouse Protein Wnt-3a,WNT3A ELISA kit
小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫試劑盒   Mouse Protein Wnt-10b,WNT10B ELISA kit
小鼠V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)免疫試劑盒   Mouse V-Ha-Ras Harvey Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog,HRAS ELISA Kit
小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)免疫試劑盒   Mouse Linker for activation of T cell,LAT ELISA Kit
小鼠T細(xì)胞表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)免疫試劑盒   Mouse T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain,CD3E/T3E ELISA Kit對甲苯甲酸   shēng huà shì jì   容量：   2～8℃   250毫克
苯甲酸酐   shēng huà shì jì   容量：   2～8℃   1克
鋇   shēng huà shì jì   容量：       25克
貝爾德-帕克瓊脂   shēng huà shì jì   容量：       100毫升
北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ)   shēng huà shì jì   容量：   RT   250克
寶石紅蛋白染色試劑   shēng huà shì jì   容量：       5克
寶石紅550   shēng huà shì jì   容量：       25克
寶石橙蛋白染色試劑   shēng huà shì jì   容量：   2～8℃   25克
胞嘧啶   shēng huà shì jì   容量：       25克
百里酚藍(lán)鈉   shēng huà shì jì   容量：       25克
百里酚藍(lán)   shēng huà shì jì   容量：   2～8°C   5克
百里酚   shēng huà shì jì   容量：       1公斤
白細(xì)胞稀釋液（計數(shù)液）   shēng huà shì jì   容量：   RT   500克