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小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞；M-NFS-60使用說明書

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更新時間：2017-01-24 13:17:51瀏覽次數(shù)：366次

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產(chǎn)品簡介

小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞；M-NFS-60使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞；M-NFS-60使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞；M-NFS-60使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性懸浮
特征特性   該細(xì)胞對IL-13和M-CSF有應(yīng)答。
培養(yǎng)條件    10%FBS
傳代方法   5.0E+04cells/ml
傳代情況 PN4
凍存條件   90%FBS+10%DMSO
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
BP4   G蛋白結(jié)合蛋白4抗體
GBP6   G蛋白結(jié)合蛋白6體
GCAP1   鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白1抗體
GCAP2   鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白2抗體
GCAP3   鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白3抗體
GCAT   氨基丙酮合成酶抗體
GCC1   高爾基體卷曲螺旋蛋白1抗體
GCC2   高爾基體卷曲螺旋蛋白2抗體
GCDH   戊二酰*脫氫酶抗體
GCHFR   GTP環(huán)反饋調(diào)節(jié)蛋白抗體
GCM2   絨毛膜特異轉(zhuǎn)錄因子GCM2抗體
Gcn1l1   廣泛控制氨基酸合成1樣蛋白1抗體
GCNT2   β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶2抗體布魯氏菌培養(yǎng)基   250g   用于布魯氏菌分離培養(yǎng)
Brucella Agar
布魯氏菌培養(yǎng)基抑菌劑   1ml*5   每支添加于200ml HB0315-1中
水稻水培養(yǎng)液   250g   用于水稻的水培養(yǎng)液
水稻赤霉菌培養(yǎng)基   250g   用于水稻中赤霉菌培養(yǎng)
FWA淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基   250g   用于淡水魚類腸道內(nèi)細(xì)菌檢測
BG11培養(yǎng)基   250g   用于藍(lán)藻細(xì)菌培養(yǎng)
BG11 Medium
ISP培養(yǎng)基   250g   用于鏈霉菌的培養(yǎng)
ISP Medium
芽孢桿菌培養(yǎng)基   250g   用于芽孢桿菌平板計(jì)數(shù)
Bacillus Megatherium Medium