【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人星形膠質瘤細胞株;U87R-DOX培養
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞
HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系
5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系
貨號 名稱 規格
CM-H001 人肺微血管內皮細胞*培養基 100mL
CM-H002 人肺大動脈內皮細胞*培養基 100mL
CM-H003 人肺大動脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H004 人肺大靜脈內皮細胞*培養基 100mL
CM-H005 人肺大靜脈平滑肌細胞*培養基 100mL
CM-H006 人肺動脈成纖維細胞*培養基 100mLCBLN1 小腦肽1抗體
CBLN2 小腦肽2抗體
CBLN4 小腦肽4抗體
CCM2 腦海綿狀血管畸形蛋白2抗體
CELSR2 表皮生長因子樣蛋白2抗體
CHRDL1 脊索生成素樣蛋白1抗體
CHURC1 神經誘導胚胎發育相關蛋白Churchill抗體
CRMP3 二氫嘧啶酶相關蛋白3抗體
CRSP9 轉錄激活蛋白CRSP9抗體
CSTP1 鈣調神經磷酸酶CSTP1抗體
CTAGE6 CTAGE6蛋白抗體
CTAGE4 皮膚T細胞淋巴瘤相關抗原4抗體
CLDND2 膜蛋白CLDND2抗體