細胞名稱 人腎小管上皮細胞;HKC使用說明書
形態特性 多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞常用于腎小管上皮細胞代謝方面的研究。STR檢測發現該細胞被人腎皮質近曲小管上皮細胞HK-2污染。
培養條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 5%FBS
傳代方法 1:3傳代;2~3天1次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:13;D13S317:9;D16S539:11,12;D18S51:12;D19S433:15,15.2;D21S11:28,30;D2S1338:17,25;D3S1358:16,17;D5S818:12;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:20,22;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:17,18;
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit 人磷脂酰* Multi-class antibodies 規格: 48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit 人*磷酸甘油酯 Multi-class antibodies 規格: 48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit 人總膽汁酸 Multi-class antibodies 規格: 48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit 人載脂蛋白C3 Multi-class antibodies 規格: 48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit 人血清總* Multi-class antibodies 規格: 48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit 人金屬硫蛋白2 Multi-class antibodies 規格: 48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit 人可溶凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1 Multi-class antibodies 規格: 48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit 人3-硝基* Multi-class antibodies 規格: 48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit 人糖胺聚糖 Multi-class antibodies 規格: 48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit 人半胱氨酰白三烯 Multi-class antibodies 規格: 48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit 人鈣腔蛋白 Multi-class antibodies 規格: 48TFGF4 英文名稱: 纖維母細胞生長因子4抗體 ?0.1ml
FRA1 英文名稱: FRA-1蛋白抗體 ?0.1ml
FTSJ1 英文名稱: 精神發育遲滯相關蛋白抗體 ?0.2ml
FAM62C 英文名稱: 延伸突觸蛋白3抗體 ?0.2ml
Fibrillin 2 英文名稱: 原纖維蛋白2抗體 ?0.2ml
FLI1 英文名稱: 尤文肉瘤FLI1蛋白抗體 ?0.2ml
FUT1 英文名稱: 巖藻糖轉移酶1抗體 ?0.2ml
FLIP delta + gamma 英文名稱: 凋亡調節蛋白δ+γ抗體 ?0.2ml
FOXO1 + FOXO3 + FOXO4 英文名稱: 叉頭蛋白O1/O3/O4抗體 ?0.2ml
FAM82B 英文名稱: 微管相關蛋白FAM82B抗體 ?0.2ml
Fibrinogen alpha chain 英文名稱: 纖維蛋白原A鏈抗體 ?0.2ml
FAIM1 英文名稱: FAS凋亡抑制分子1抗體 ?0.2ml
FAIM2 英文名稱: FAS凋亡抑制分子2 ?0.1ml