詳細介紹
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
Herpesvirus Simiae(HVS) | EY-P6812 |
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光
幾種傳統熒光定量PCR方法簡介:
1)內參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
腺苷脫酶測試盒shēng huà shì jì容量:RT200支/包 轉基因玉米T14品系試劑盒20次
PH緩沖液 PH1.0(20℃)NA Humanselenoprotein1,SEP1ELISAKit人硒蛋白1(SEP1)ELISA試劑盒規格:96T/48T
L-(-)樟腦磺酸5克RT,避光 小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 ,英文名: IFN-β/IFNB ELISA Kit
5-甲氧基-2-甲基色胺 5-Methoxy-alpha-methyltryptamine,98% 1137-04-8 1G 通用試劑 大鼠基質金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA檢測試劑盒Ratmaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAkit 96T/48T
硬脂醋;十八醋 litxium stqcrctq 4482-1-2 人P0蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒 Human myelin protein zero aibody IgM ELISA Kit
品紅亞鈉培養基(濾膜法用)1米 小鼠前列腺素F(PGF)免疫試劑盒 Mouse Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit
Tween60 100ml Sigma分裝 轉化生長因子β受體2(TGF-βR2)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-βR2 ELISA Kit
甘油醛-3-嶙酸脫氫酶shēng huà shì jì容量:5克 Humaotalprostatespecificaigen,tPSAELISA試劑盒人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
4-拂本加醋;隊拂本加醋 4-Fluorobqnzoic ccid 426--4 ELISAKitEL小鼠內皮脂肪酶規格:48T/96T
反玉米素核苷shēng huà shì jì容量:25克 Humanai-PL7-aibodyELISAKit人PL7抗體/抗蘇氨酰NA合成酶(PL7)ELISA試劑盒規格:96T/48T
基瓊脂糖凝膠4Bshēng huà shì jì容量:100KU Rat vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 大鼠維生素D2(VD2)ELISA試劑盒
DNAMarkerⅠ,Wide 10次/30次 Gibco分裝 HumanInhibin,INH-AELISAKit 人抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
四化500克RT Humancoloncancer-specificaigen-3,CCSA-3ELISA試劑盒人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)ELISA試劑盒規格:96T/48T
流醋軟骨速內 Chondroitin Sulfctq wo7ium 908-7-9 組織ATP生物發光法定量檢測試劑盒50次
馬來酸鈉 Maleic acid disodium salt hydrate (≥9... 25880-69-7 10G 通用試劑 Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit人同酸脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒規格:96T/48T
猿皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒寶石橙蛋白染色試劑25克2~8℃ Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
(PPLO肉湯) 小鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)ELISA試劑盒 ,英文名: HPCⅢ ELISA Kit
β-基奈,英文名或英文縮寫:2-Amino,級別:BR,56-58℃,規格:10克 蛇毒因子(CVF)ELISA檢測試劑盒Cobravenomfactor,CVFELISAKit 96T/48T
5-叔丁基-2-羌基本全 5-TqRT-BUTYL-2-xy7noXY-BqNZcLDqHYDq 72-23-3 人CD19分子(CD19)免疫試劑盒 Human CD19 ELISA Kit
3-基-1,2-丙二醇,英文名或英文縮寫:3-Ami,2-propanediol,級別:CP,規格:5克 英文名稱MouseMCP-3ELISAkit小鼠單核細胞趨化蛋白-3(MCP-3)規格:96T/48T
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準