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詳細介紹
| 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
| 嗜水氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | Aeromonas hydrophila | EY-P6353 |
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：
1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
嗜水氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
重酸鉀shēng huà shì jì容量：5克 Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISA試劑盒人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酵母氮基礎-無基酸無銨NA HumanAquaporin1,AQP-1ELISAKit人水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
二乙酸鋁，英文名或英文縮寫：Aluminum acetate basic，級別：AR，規(guī)格：100毫升 人β乳球蛋白(β-Lg)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
玫紅酸 p-Rosolic acid,85% 603-45-2 25G 通用試劑 兔子骨形成蛋白2(BMP2)免疫試劑盒 Rabbit Bone morphogenetic protein 2,BMP2 ELISA kit
DL-柏安醋 DL-2-cmino-4-mqthylpqntcnoic ccid 38-39- 沙眼衣原體蛋白酶樣活性因子(CPAF)ELISA試劑盒 ，英文名： CPAF ELISA Kit
碳酸shēng huà shì jì容量：100克 MouseIerleukin1,IL-1ELISA試劑盒小鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
(纖維素DE-52) ELISAKitMIP-1α/CCL3兔子巨噬細胞炎性蛋白1α規(guī)格：48T/96T
N-乙酰-D-亮酸1公斤 ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgGELISAKit雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
ALPHA-乳清蛋柏 ≥95% (-20°C) cLPHc-LcCTcLBUMIN 9021-9-0 人高密度脂蛋白(HDL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
D(+)海藻糖 D(+)-Trqhclosq dihydrctq 6138/3/4 小鼠白介素16(IL-16)免疫試劑盒 Mouse Ierleukin 16,IL-16 ELISA KIT
麥迪、麥白霉素檢定培養(yǎng)基支RT HumanchemerinELISAKit人chemerinELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
98%(劇毒)Hexametxyleneimine 人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
無水四硼酸鈉1克 兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒 Rabbit Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit
2-甲氧基乙醇 2-Methoxyethanol,99.8% 109-86-4 100ML 通用試劑 前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA試劑盒 ，英文名： PGDS ELISA Kit
偶氮脒類引發(fā)劑V60/偶氮二/2,2-偶氮二/2，2′偶氮二(2-甲基)/發(fā)孔劑N/AIBN/VAZO64 高純，98%，及 250克 國產/進口 rabbitImmunoglobulinA,IgAELISA試劑盒兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
肝素抗凝管支RT 小鼠CD4分子(CD4)ELISA試劑盒 ，英文名： CD4 ELISA Kit
(小牛胸腺DNA) 大鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA檢測試劑盒Ratmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAkit 96T/48T
電解錳shēng huà shì jì容量：100克 人COLL2-1NO2 免疫試劑盒 Human COLL2-1NO2 ELISA kit
柏屈菜醋 Chqlidonic ccid 1999/3/1 英文名稱MouseIP-10ELISAKit小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10)規(guī)格：96T/48T
硫柳鈉 Thimerosal (USP grade, 97-101%) 54-64-8 1G 通用試劑 冰凍切片免疫組織化學HRP酶聯(lián)DAB基礎檢測試劑盒(無一抗和二抗)50次
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