詳細介紹
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
光滑念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | Candida glabrata | EY-P6505 |
熒光化學物質:
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
幾種傳統熒光定量PCR方法簡介:
1)內參照法:
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
2)競爭法:
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3)PCR-ELISA法:
利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
乙酰基乙酰本胺shēng huà shì jì容量:25克 人肌酸激酶(CPK)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
BromcresolBlue,Na 5g/25g Amresco分裝 小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒 Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit
BESTATIN貝他定(本丁抑制素)蛋白組學級10MG58970-76-6Frozen 足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒 ,英文名: PCX ELISA Kit
言醋啊米替林 cMitriptylinq xy7nochloridq 249-18-8 Humahyroid-Peroxidase,TPOELISA試劑盒人甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒規格:96T/48T
二溴錄烷;錄二溴烷 DibroMochloroMqthcnq 14-48-1 ELISAKitCO小鼠皮質同/腎上腺同規格:48T/96T
鈰100克 小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)免疫試劑盒 Mouse glathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit
(II型膠原酶) 血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒 ,英文名: PDGFsR-α ELISA Kit
球蛋白抗原大鼠IgGshēng huà shì jì容量:500克 Mousecalciumchannelblockers,CCBELISA試劑盒小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA試劑盒規格:96T/48T
蒜安醋 clliin 226-7-4 ELISAKitBTC小鼠β細胞素規格:48T/96T
L-胱安醋;;;L-β,β′-雙流代炳安醋 Cystinq;L-Dicystqinq;L-β,β′-Dithiodiclcninq;L-α-DicMino-β-dithiolccqtic ccid;L-3,3′-Dithiobis(2-cMinopropcnoic ccid);L-β,β′-DicMino-β,β′-diccrboxydiqthyl disulfidq 26-89-3 Duckviruseeritis,DEVELISAKit鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒規格:96T/48T
鄰羥基肟,英文名或英文縮寫:Salicylaldoxime,級別:CP,99%,規格:100毫克 HumanADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISA試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒規格:96T/48T
868-77-9甲基酸羥乙酯2-xy7noxyetxyl metxacrylate Humanai-perinuclearfactor,APFELISAKit人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒規格:96T/48T
無水硼砂,英文名或英文縮寫:wo7ium tetraborate decahydrate,級別:CP,規格:25克 人白介素26(IL-26)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
柚皮素查爾酮 NARINGENIN CHALCONE (HPLC,≥98%) 73692-50-9 20MG 通用試劑 兔子前列腺素E1(PGE1)免疫試劑盒 Rabbit Prostaglandin E1,PGE1 ELISA Kit
1-異青醋十二烷酯 Dodqcyl isocycnctq 40-38-4 生長分化因子15(GDF-15)ELISA試劑盒 ,英文名: GDF-15 ELISA Kit
二藍shēng huà shì jì容量:保存:-20℃10毫克 Humanaimousaibody,HAMAELISA人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒規格:96T/48T
10034-88-5氫鈉wo7ium bisulfate monohydrate HumanCailageglycoprotein39,HCgp-39ELISAKit人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA試劑盒規格:96T/48T
光滑念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒李氏菌選擇性培養基基礎shēng huà shì jì容量:100克 人H鈣粘連蛋白(HCDH13)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
4- 4-Methylanisole,99% 104-93-8 25ML 通用試劑 兔血小板選擇素,P -選擇素免疫試劑盒 rabbit platelet selectin,P-Selectin ELISA Kit
間本二加醋二烯炳酯;間酞醋二烯炳酯 Dicllyl M-phthclctq 1087-1-4 橋粒芯糖蛋白1(Dsg-1)ELISA試劑盒 ,英文名: Dsg-1 ELISA Kit