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技術(shù)文章
ELISA試劑盒的測定結(jié)果
閱讀：1181 發(fā)布時(shí)間：2016-4-1
引起ELISA試劑盒測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測定的影響做如下討論。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。ELISA試劑盒解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體
ELISA試劑盒系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA試劑盒系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA試劑盒方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig （s） 抗體。這些病人ELISA試劑盒測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應(yīng)物質(zhì)
類帝高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對(duì)測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，ELISA試劑盒均對(duì)ELISA試劑盒測定結(jié)果有干擾作用。ELISA試劑盒