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白介素一6的測(cè)定方法
閱讀：4354 發(fā)布時(shí)間：2015-12-31(一)原理
白介素一6(interleukin一6，IL一6)在體外能促進(jìn)B細(xì)胞雜交瘤的生長(zhǎng)，故又稱為雜交瘤生長(zhǎng)因子(HGF)。小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞只有在IL一6存在的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng)，可以作為指示細(xì)胞來(lái)測(cè)定待檢樣品中IL-6水平。這類IL一6依賴的小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系有MH60·BSF2、B9、7TDl、KD823等，其中以MH60·BSF2細(xì)胞使用zui多。
(二)材料
1．IL-6待測(cè)樣品，用10％FCS RPMI 1640培養(yǎng)液倍比稀釋。2．IL一6標(biāo)準(zhǔn)品。
3．IL一6依賴的MH60·BSF2細(xì)胞系。
4．10％FCS RPMI l 640培養(yǎng)液。
5．MTT(5μg／ml溶于PBS)。
6．酸性異丙醇或二甲基亞砜(DMSO)。
7．酶標(biāo)儀。
(三)方法
1．取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MH60·BSF2細(xì)胞，重懸于培養(yǎng)液中。
2．將待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品IL一6倍比稀釋，分別加入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100μl.
3．將懸浮細(xì)胞離心棄上清液，配成2×105／ml細(xì)胞，加入100μ1于各孔中。
4．37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)481-l后，加MTT(5mg／m1)，每孔20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。
5．離心棄上清液，加酸化異丙醇溶液(O．04 mol／L)，每孔200μl，吹打混勻后在酶標(biāo)儀上測(cè)OD值，計(jì)算IL一6活性單位。
(四)結(jié)果分析
以O(shè)D值對(duì)IL一6標(biāo)準(zhǔn)品稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)得樣品的OD值后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得出樣品IL一6的含量。
(五)注意事項(xiàng)
1．細(xì)胞洗滌要充分、輕柔，每次棄洗滌上清液力求*。
2．為了增加檢測(cè)方法的敏感性，可采用新復(fù)蘇MH60·BSF2細(xì)胞。