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胎牛血清白蛋白加熱法提取

閱讀:545發布時間:2015-5-28

胎牛血清白蛋白采用加熱法提取是進來常用的白蛋白提取方法。

1 材料與方法  

    胎牛血清取近郊屠宰場,以檸檬酸三鈉為抗凝劑,血液采集后隨即分離出血漿備用.  需要的試劑有血清白蛋白;溴甲酚氯;醋酸纖維素薄膜,其余試劑均為分析純. 提取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,DF-C型電泳儀,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計

    白蛋白含量測定 采用溴甲酚氯法,以胎牛血清白蛋白為標準. 白蛋白純度的測定 采用醋酸纖維素薄膜電泳法. 吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值,然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表示. 

    胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分離出血漿,加一定量的蒸餾水稀釋,再加入適當的穩定劑和蛋白沉淀劑,然后按下述方法進行實驗處理:   

1 不同pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下,試驗不同pH值對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。 

2 不同加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下,試驗不同加熱保溫時間對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。 

3 不同稀釋倍數對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下,試驗不同稀釋倍數對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。

4 不同加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下,試驗不同加熱溫度對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。


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