Kassanis 培養基特殊培養法
二倍體細胞培養法與一般培養相同,關鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養液(新舊培養液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養的人或動物胚胎成纖維細胞,90%匯合時制成細胞懸液,再按105細胞/毫升重新接種培養。
2.在細胞半匯合時,準備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細胞的量加入到培養瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細胞經上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養液、再培養24小時,*消化細胞制成懸液,按5×104(104細胞/cm2)接種入新Kassanis 培養基中。
4.48小時后,即可用于細胞克隆之用。
Kassanis 培養基細胞分離(克隆)培養
多孔塑料培養板單細胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細胞,吸出瓶內培養液,加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備:做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液,然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液,zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養板每孔內加0.5毫升。接種時要迅速準確,爭取在zui短時間內加完,以免培養液蒸發,然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養。
4.標記:培養6~12小時后,待細胞下沉冰貼附于培養板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標記下含有單個細胞的孔,置CO2溫箱培養。在培養中一般無需換液,只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養基,但不要吸除過多,余少許,以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養液,繼續培養3~4周。待孔內細胞增至500~600個時,可進行分離培養。
5.分離擴大培養:培養86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔,先吸除舊培養液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細胞群即可,如過多,應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發現細胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養基,用吸管輕輕吹打,當細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內,移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養液,置CO2溫箱中繼續培養、增殖,使之形成新的細胞群后,即轉用常規培養法培養。
Kassanis 培養基相關產品如下:hz0001 倉鼠腎成纖維細胞 BHK-21 [C-13]
hz0002 倉鼠肺細胞 CHL
hz0003 倉鼠肺細胞 V79
hz0004 倉鼠卵巢細胞 CHO
hz0005 倉鼠肺細胞 R 1610
hz0006 倉鼠卵巢細胞,二氫*還原酶缺陷 CHO/dhFr-
hz0007 倉鼠卵巢細胞亞株 CHO-K1
hz0008 倉鼠卵巢細胞 Lec1
hz0009 中國倉鼠卵巢細胞 CTLA4 Ig-24
hz0010 長尾綠猴胚胎細胞 4179
hz0011 長尾綠猴腎細胞 4647
hz0012 大鼠胸大動脈平滑肌細胞 A7r5
hz0013 大鼠成肌細胞 L6
hz0014 大鼠肺泡巨噬細胞 NR8383
hz0015 大鼠心肌細胞 H9c2(2-1)
hz0016 大鼠肝癌細胞 CBRH-7919
hz0017 大鼠肝癌細胞 RH-35
hz0018 大鼠肝細胞 BRL
hz0019 大鼠肝細胞 BRL 3A
hz0020 大鼠胰腺外分泌細胞 AR42J
hz0021 大鼠膠質瘤細胞 C6
hz0022 大鼠乳腺癌細胞 SHZ-88
hz0023 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化) PC-12
hz0024 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) PC-12
hz0025 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12
hz0026 大鼠腎細胞 NRK
hz0027 大鼠腎細胞 NRK-52E
hz0028 大鼠嗜堿性細胞白血病細胞 RBL-2H3
hz0029 大鼠雪旺細胞 RSC96
hz0030 貂肺上皮細胞 Mv.1.Lu
hz0031 非洲綠猴SV40轉化的腎細胞 COS-1
hz0032 非洲綠猴SV40轉化的腎細胞 COS-7
hz0033 非洲綠猴腎細胞 CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]
hz0034 非洲綠猴腎細胞 Vero
hz0035 非洲綠猴腎細胞 VERO C1008 (E6)