幽門(mén)螺桿菌選擇性添加劑特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以?xún)H覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動(dòng)物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時(shí)制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時(shí)，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過(guò)夜；或用射線(xiàn)單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時(shí)，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新幽門(mén)螺桿菌選擇性添加劑中。
4.48小時(shí)后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無(wú)需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過(guò)于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過(guò)多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過(guò)多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開(kāi)底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：C3H 10T1/2 2A6 小鼠成纖維細(xì)胞
CHOdhfr 二氫*缺陷型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞
CHO-K1 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞
COS-1 非洲綠腎
COS-7 非洲綠猴腎細(xì)胞
CV-1 猴腎細(xì)胞
IAR20 小鼠肝細(xì)胞
IEC-6 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞
LL-PK1, 豬腎細(xì)胞
MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細(xì)胞
MDCK 狗腎細(xì)胞
MEF 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NIH3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
P815 小鼠肥大細(xì)胞
PA12 小鼠成纖維細(xì)胞
RTE 大鼠氣管上皮細(xì)胞
SF9 昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞
SMC 兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
Vero 猴腎細(xì)胞
WEHI-3 小鼠血液細(xì)胞
Y2 小鼠成纖維細(xì)胞
L6 大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞
NRK 小鼠結(jié)締組織細(xì)胞
AtT-20 小鼠垂體瘤
BC3H1, 鼠腦瘤
BV-2 小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C6 大鼠腦膠質(zhì)瘤
Cyc-tAg 小鼠T淋巴細(xì)胞瘤（SV40T抗原轉(zhuǎn)染）
EL-4 鼠T淋巴細(xì)胞瘤
FOX-NY 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
GH3 大鼠垂體瘤細(xì)胞
GT1.1 小鼠垂體瘤細(xì)胞（分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素）
HEPA1-6 小鼠肝癌細(xì)胞
會(huì)員1.png)
