人黑色素瘤細(xì)胞,HME4細(xì)胞基本特性
細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài):上皮樣;多角形
細(xì)胞數(shù)量:1×106個(gè)細(xì)胞數(shù)
細(xì)胞傳代:1:2傳代
人黑色素瘤細(xì)胞,HME4細(xì)胞的原位染色
(1)貼壁生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期細(xì)胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長(zhǎng),待長(zhǎng)到50%~80%滿時(shí),凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞。
(2)將不同時(shí)間點(diǎn)處理的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色,染色步驟同上。
(3)將染色的爬片細(xì)胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細(xì)胞中的定位。
臨床病理切片的染色、檢測(cè)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)、檢測(cè)。
分析TFAR19蛋白在人體內(nèi)各組織器官的分布及定位
透射電子顯微鏡觀察
結(jié)果評(píng)判:凋亡細(xì)胞體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。
DNA片斷化檢測(cè)
細(xì)胞凋亡時(shí)主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。人黑色素瘤細(xì)胞,HME4細(xì)胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細(xì)胞量很少,還可在分離提純DNA后,用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)使DNA標(biāo)記,然后進(jìn)行電泳和放射自顯影,觀察凋亡細(xì)胞中DNA ladder的形成。
大分子染色體DNA片段的測(cè)定
細(xì)胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段。所有超過一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線性DNA的雙螺旋半徑超過凝膠半徑時(shí),即達(dá)到分辨力的極限。此時(shí)凝膠不再按分子量的大小來篩分DNA,DNA像通過彎管一樣,以其一端指向電場(chǎng)一極而通過凝膠,這種遷移模式稱之為"爬行"。因此,細(xì)胞凋亡早期產(chǎn)生的50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來分離。通常采用脈沖電泳技術(shù)可圓滿地解決這一問題。這個(gè)方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場(chǎng)。每當(dāng)電場(chǎng)方向改變后,大的DNA分子便滯流在爬行管中,直至新的電場(chǎng)軸向重新定向后,才能繼續(xù)向前移動(dòng)。DNA分子量越大,這種重排所需要的時(shí)間就越長(zhǎng)。當(dāng)DNA分子變換方向的時(shí)間小于電脈沖周期時(shí),DNA就可以按其分子量大小分開。
人黑色素瘤細(xì)胞,HME4細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品如下:hz-45 A-704(人腎癌細(xì)胞)
hz-5892 NCI-H1755 [H1755](人肺癌細(xì)胞)
hz-52 SK-HEP-1(人肝癌細(xì)胞)
hz5844 NCI-H838 [H838](人肺癌細(xì)胞)
hz-77 SK-OV-3 [SKOV-3](人卵巢癌細(xì)胞)
hz-2119 HPAC(人胰腺癌細(xì)胞)
hz-1435 PC-3(人前列腺癌細(xì)胞)
hz-12 SW 1088[SW-1088; SW1088](人腦星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞)
hz-85 EB-3 [EB3](人淋巴樣Burkitt淋巴瘤細(xì)胞)
hz-32 HT-3(人子宮頸癌細(xì)胞)
hz-1803 TT(人骨髓樣甲狀腺癌細(xì)胞)
hz-1978 ES-2(人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞)
hz-229 LoVo(人結(jié)腸癌細(xì)胞)
hz-38 HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞)
hz-7744 TE 115.T(人軟組織纖維瘤細(xì)胞)
hz-104 Cates-1B(人睪丸淋巴胚胎性癌細(xì)胞)
hz-2233 SNU-398(人肝癌細(xì)胞)
hz-8064 Hep 3B2.1-7 [Hep 3B; Hep-3B; Hep3B](人肝癌細(xì)胞)
hz-2235 SNU-182(人肝癌細(xì)胞)
hz-8024 PLC/PRF/5(人肝癌細(xì)胞)
hz-169 WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤)
hz-1572 PA-1(人卵巢畸胎瘤細(xì)胞)
hz-126 Hs 578T(人乳腺成纖維細(xì)胞)
hz-125 Hs 578Bst(人乳腺成纖維細(xì)胞)
hz-7762 TE 354.T(人皮膚基底細(xì)胞癌)
hz-7761 TE 353.Sk(人正常皮膚細(xì)胞)
hz-228 SW480 [SW-480](人結(jié)腸癌細(xì)胞)