人淋巴細胞與倉鼠肺細胞雜交細胞,FD4細胞
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人淋巴細胞與倉鼠肺細胞雜交細胞,FD4細胞基本特性
細胞生長:貼壁生長
細胞形態(tài):上皮樣;多角形
細胞數(shù)量:1×106個細胞數(shù)
細胞傳代:1:2傳代
人淋巴細胞與倉鼠肺細胞雜交細胞,FD4細胞的原位染色
(1)貼壁生長的對數(shù)期細胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長,待長到50%~80%滿時,凋亡誘導劑處理細胞。
(2)將不同時間點處理的細胞進行免疫熒光染色,染色步驟同上。
(3)將染色的爬片細胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細胞中的定位。
臨床病理切片的染色、檢測。
原代細胞的培養(yǎng)、檢測。
分析TFAR19蛋白在人體內(nèi)各組織器官的分布及定位
透射電子顯微鏡觀察
結(jié)果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。
DNA片斷化檢測
細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。人淋巴細胞與倉鼠肺細胞雜交細胞,FD4細胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細胞量很少,還可在分離提純DNA后,用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)使DNA標記,然后進行電泳和放射自顯影,觀察凋亡細胞中DNA ladder的形成。
大分子染色體DNA片段的測定
細胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長的DNA大片段。所有超過一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線性DNA的雙螺旋半徑超過凝膠半徑時,即達到分辨力的極限。此時凝膠不再按分子量的大小來篩分DNA,DNA像通過彎管一樣,以其一端指向電場一極而通過凝膠,這種遷移模式稱之為"爬行"。因此,細胞凋亡早期產(chǎn)生的50~300kbp長的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來分離。通常采用脈沖電泳技術(shù)可圓滿地解決這一問題。這個方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場。每當電場方向改變后,大的DNA分子便滯流在爬行管中,直至新的電場軸向重新定向后,才能繼續(xù)向前移動。DNA分子量越大,這種重排所需要的時間就越長。當DNA分子變換方向的時間小于電脈沖周期時,DNA就可以按其分子量大小分開。
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hz-11372 hFOB 1.19(人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞)
hz-1777 HIT-T15(倉鼠beta胰島細胞)
hz-11506 Beta-TC-6(小鼠胰腺癌beta細胞)
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hz-2196 GC-2spd(ts)(小鼠精母細胞)
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hz-138 Hs 683(人腦視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)
hz-7002 Hs 1.Tes(正常人睪丸細胞)
hz-7131 Hs 181.Tes(正常人睪丸細胞)
293T 人胚腎T細胞
CCC-ESF-1 人胚胎皮膚成纖維細胞
CCC-HPF-1 人胚肺二倍體細胞
DMF7 雙位點HC-KIT受體細胞株
FC33 ASP2人胚胎腎細胞轉(zhuǎn)化細胞
FIP293 FIP293(來源于HEK293)
HEK-293 人胚腎細胞
HFF 人前皮膚成纖維細胞
HK-2 人腎近曲小管上皮細胞
HKC 人胚腎上皮細胞
HSF 人皮膚成纖維細胞
MRC-5 人胚肺成纖維細胞
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CCC-HHM-2 人胚胎心肌組織來源細胞
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CCC-hzE-2 人胚胎氣管細胞
CCC-hz-2 人胚膀胱組織來源細胞
CCC-hzE-2 人胚氣管組織來源細胞
CCC-HEK-1 人胚腎二倍體細胞
CCC-HEL-1 人胚肝二倍體細胞
CCC-HHM-2 人胚心肌組織來源細胞