ELISA試劑盒的溫育注意事項(xiàng)
在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶聯(lián)絡(luò)物后。抗原抗體反應(yīng)的結(jié)束需求有必定的溫度和時(shí)間，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的機(jī)遇，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐步平衡的進(jìn)程，因此需經(jīng)渙散才能達(dá)到反應(yīng)的結(jié)尾。在這以后參與的酶符號(hào)抗體與固相抗原的聯(lián)絡(luò)也相同如此。這便是為什么ELISA反應(yīng)老是需求必定時(shí)間的溫育。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體聯(lián)絡(luò)的適合溫度。ELISA試劑盒在建立ELISA辦法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研討時(shí)，試驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)。為加速反應(yīng)，可進(jìn)步反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中過(guò)夜，以構(gòu)成zui多的堆積。但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在ELISA中一般不予選用。
保溫的辦法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度敏捷平衡。為避免蒸騰，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性出色的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)矩的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴仍是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能敏捷平衡。
ELISA試劑盒室溫溫育的反應(yīng)，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)峻束縛在規(guī)矩的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書的懇求控制溫育。室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留心溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)矩力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板一起測(cè)定。
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