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貨號 | BJ-01X6665 |
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操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
中文名稱:Ca2+鈣離子染色試劑盒(Fluo-3,AM法)
英文名稱:
產品規格:50T|100T
產品貨號:BJ-01X6665
鈣離子檢測試劑盒采用Fluo-3,AM 細胞內鈣離子濃度的熒光探針檢測鈣離子。 Fluo-3,AM穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內。 Fluo-3 游離配體幾乎是非熒光性的,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。但是,當它與細胞內鈣離子結合后可以產生較強的熒光,熒光會增加60 至100 倍,大激發波長為506nm,大發射波長為 526nm。實際檢測時推薦使用的激發波長為488nm 左右,發射波長為 525~530nm。可以使用熒光顯微鏡、酶標儀、激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。 儲存條件:-20℃避光保存。 有效期:一年。 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備F-12K培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
50T 犬瘟熱病毒RT-PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人鐵反應元件結合蛋白2(IRE-BP 2)ELISA試劑盒
2 ug pET-48b(+) pET-48b(+) 低溫運輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL. 牛特定基因序列(Bovine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
250mL Citrate Buffer(檸檬酸鹽緩沖液),0.5M,pH5.0 Citrate Buffer,0.5M,pH5.0 常溫保存胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE) 進口、國產Trypticase Soy-Yeast Extract Agar用于單增李氏菌的分純,培養,可用于做7%羊血瓊脂(SN標準)250
1mg D Actinomycin D 4℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Corticotropin
100g 硫酸銨 Ammonium Sulfate 室溫保存亮綠瓊脂培養基進口、國產Brilliant Green Agar250克沙門氏菌分離培養
2 ug pBMN-IRES-GFP pBMN-IRES-GFP 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人松弛素(RLN3)ELISA試劑盒
200U Bsu DNA 聚合,大片段 Bsu DNA Polymerase,Large Fragment -20℃保存 0.78-50 ng/mL 人防御素5(DEF5)ELISA試劑盒
1mg 親和素 Avidin, Chicken Egg White -20℃保存 0.312-20 ng/mL 綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
酪蛋白胨大豆吐溫20培養基 Casein DigestSoy LecithinPolysorbate 20 Medium 250gASS 瓊脂進口、國產Antibiotic sulfonamide sensitivity-test agar用于磺胺類靈敏度試驗(WHO方法)250
200mL 電泳級丙烯酰胺溶液(干粉型) Acrylamide Solution(19:1Po`wder),EG 常溫 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Humanin-like protein 6
50T 轉基因植物NOS基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Microtubule-associated protein tau
Ca2+鈣離子染色試劑盒(Fluo-3,AM法)人VIII(FVⅢ)免疫試劑盒*直銷
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