細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

中文名稱：嗜酸性粒細胞稀釋液(計數液)

英文名稱：

產品規格：100ml

產品貨號：BJ-01X6721

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Measles Virus麻疹病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FOXO1 + FOXO3 + FOXO4  叉蛋白O1/O3/O4抗體 規格: 0.2ml

Herba polygoni avicularis萹蓄探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Ret/HSCR1  原基因酪蛋白激受體RET/多發性內分泌瘤和甲狀髓樣蛋白抗體 規格: 0.1mlTAGL2/TAGLN2  細胞骨架相關蛋白2抗體 0.2ml

Avian Rotavirus(ARV)禽輪狀病毒RT-LAMP試劑盒（停） 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FADS1  脂肪酸去飽和1抗體 規格: 0.2mlphospho-MAPK14(Thr180)  磷酸化p38MAPK抗體 規格: 0.1ml

Paenibacillus larvae幼蟲芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CD158i  NK細胞抑制性受體2DS4抗體 規格: 0.2mlARSK  芳香基硫酸酯K抗體 規格: 0.2ml

Radix ophiopogonis麥冬LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/RBITC  羅丹明標記的兔抗人IgG F(ab')2  規格: 0.1mlPhospho-MAPKAPK2(Thr334)  磷酸化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體 規格: 0.1ml

Human Coronavirus(HCoV-229E)人229E RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PHGDH  磷酸甘油酸脫抗體 0.2mlphospho-GABBR2 (Ser892)   磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體 規格: 0.1ml

Mycoplasma pneumoniae肺炎支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周CCL12/MCP5  單核細胞趨化蛋白5抗體 規格: 0.2mlWNK3 protein  絲/蘇激家族成員的基因WNK3抗體 規格: 0.1ml

Cotton Leaf Crumple Virus(CLCrV)棉花皺葉病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NLRP10  富含亮重復結構域蛋白10抗體 規格: 0.2mlRNF170  環指蛋白170抗體 規格: 0.2ml

Influenza Virus A N1（AIV-N1）甲型流感（）病毒N1亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-Histone H1.4(Thr18)  磷酸化組蛋白H1.4抗體 規格: 0.1mlPlastin L  淋巴細胞胞漿蛋白LCP1抗體 規格: 0.2ml

Heterakis isolonche自然感染雉異刺線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Cyclin A1  周期素A1蛋白抗體 規格: 0.2mlphospho-FANCD2(Ser222)  磷酸化FANCD2抗體 規格: 0.1ml

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