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人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50T

品       牌

廠商性質(zhì)其他

所  在  地上海市

更新時間:2020-04-01 15:53:06瀏覽次數(shù):515次

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人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,從而大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性。

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Human Herpesvirus

貨號

BJ-R6825

產(chǎn)品特點:
1. 人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記:
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

3′端DNA地轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次

 肌動蛋白(ACTIN)結(jié)合分子(binding molecules)檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

植物結(jié)合吲哚-3-乙酸(IAA)熒光定量檢測試劑盒(包括萃取) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

細(xì)胞糖原高希爾(PAS)法染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次

脂肪酸轉(zhuǎn)運功能檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

植物精氨酸(arginine)含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

石蠟切片色素(MELANIN)染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次

鈣泵PMCA蛋白表達(dá)檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

植物線粒體粗提分離試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次

體單胺氧化酶(MAO)總活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

冰凍切片制片預(yù)處理脫水 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:100毫升

內(nèi)切核酸酶III處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次

人皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒NADH脫氫酶5(ND5)重組蛋白英文名稱:Recombinant NADH Dehydrogenase 5 (ND5)

White MediumBR5升國產(chǎn)/進(jìn)口

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基(TSI) 規(guī)格: 250g 用途: 用于鑒別腸道菌發(fā)酵蔗糖、糖、葡萄糖及產(chǎn)生硫化氫的生化反應(yīng)

小鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基SuperPolymer Rabbit&Mouse HRP Kit(DAB)/Super Polymer-二步法IHC試劑盒(帶DAB顯色)

BEL-7405(人肝細(xì)胞)苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti

細(xì)菌篩選培養(yǎng)基/Bacterium Screening MediumBR100克國產(chǎn)/進(jìn)口

BRL-3A(大鼠正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

改良MSRV培養(yǎng)基配套試劑 規(guī)格: 10支/盒 用途: 添加至改良MSRV培養(yǎng)基瓊脂基礎(chǔ)(023025)中制成改良MSRV培養(yǎng)基瓊脂

大鼠肝星形細(xì)胞英文名稱:HSC-T6

巴斯德畢赤酵母 Pichia pastoris糙皮側(cè)耳 Pleurotus ostreatus

人胎盤絨毛膜細(xì)胞*培養(yǎng)基嗜熱棲熱菌 Thermus thermophilus

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